膠原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解,，水解條件溫和,，反應(yīng)速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定,，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶,、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法,，即利用酶液直接提??；二步法,，即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取，然后再用酶提取,。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑,，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶,，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物,。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對提取結(jié)果的影響,，給出了酶對膠原提取較佳工藝配比,，酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時(shí)效果較佳，而使用無花果蛋白酶時(shí),，0.01的配比較佳,。在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。南京鼠尾膠原廠家

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋,。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連,，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。徐州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法,。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液,、濃縮培養(yǎng)基,、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力,。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。 B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中,，會(huì)由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即 混勻,。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測試),。加入 760ul 的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 注意事項(xiàng) 型在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠,，在操作過程中要 盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。

膠原蛋白的功效與作用：一提起膠原蛋白,，女性朋友們眼睛都放光了,，因?yàn)槲覀兌贾滥z原蛋白被稱為我們皮膚的“軟黃金”，層中70%都是膠原蛋白,，膠原蛋白含量的多少?zèng)Q定克皮膚的年輕程度,！是讓我們皮膚變得有彈性的東西。大部分只知道需要補(bǔ)充膠原蛋白,，但是卻不知道什么時(shí)候需要補(bǔ)充膠原蛋白,，總認(rèn)為自己還年輕不需要補(bǔ)充，其實(shí)這是錯(cuò)誤的觀念,，膠原蛋白在女性20歲的時(shí)候就已經(jīng)開始流失了,，含量逐漸下降，25歲后進(jìn)入流失的高峰期,，40歲時(shí)的含量不到80歲的一半,，所以我們應(yīng)該20歲就開始補(bǔ)充膠原蛋白，以保持皮膚的年輕狀態(tài),。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。昆明鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。南京鼠尾膠原廠家

生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。南京鼠尾膠原廠家