外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經過優(yōu)化處理,,適用于細胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液(腦脊液,、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理,。2.當血清,、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心,。3.針對外泌體標志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進行Westernblot檢測,,可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量,。近年來,,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,,可通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成多泡內涵體,,內涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA,、蛋白質、microRNA,、DN段等多種物質,,存在于血液、唾液,、尿液,、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞,。如今,,研究已經發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展,、神經細胞信號轉導過程中都發(fā)揮著重要作用,。珠海外泌體提取試劑推薦廠家外泌體提?。焊咚匐x心以消除更大的囊泡,。
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,,包括內皮細胞、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等,。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸,、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路,。二是在細胞外基質中,,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,,從而細胞內的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質,、mRNA以及microRNA。
密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣,,用的較少,。原理是:像所有的脂質小囊泡一樣,,外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,,其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml,,將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質上,,隨后通過離心將外泌體分離,。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時,,對離心時間極為敏感,。具體步驟是:收集培養(yǎng)2d的上清液,。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,。
PS不是你想有,,想有就能有,迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,,并非所有的外膜表面都暴露PS,。例如,細菌來源的外泌體膜表面沒有PS,因此,,本款試劑不能提取這種外泌體?,F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS,但是上述的外泌體標記根據(jù)細胞種類不同表現(xiàn)出的信號強弱差大,,通過利用本試劑盒PS親和法捕捉,、提取外泌體是較好的方法。:這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,,1次提取的外泌體量大概是多少,?實驗樣品的種類和體積不同,提取的外泌體量也不一樣,。Wako的操作實例中,,一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL(BCA法檢測),粒子數(shù)1~2×1010(NanoSightLM10檢測)(經莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后,,對其進行提?。A硗?,和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,,可回收約34μg/mL蛋白質(BCA法檢測),,約5×109/mL的粒子數(shù)(NanoSightLM10檢測),。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液。由于外泌體的特殊結構和功能,,使得它具有潛在的應用價值,。徐州正規(guī)外泌體提取試劑平均價格
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng),。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節(jié)性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應,;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,,從而導致一些病癥的生長和轉移,。在肺病的侵襲和轉移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱,,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關。此外,,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,,進而促進肺病的轉移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點,。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,,但也有報道稱,,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物鄭州正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
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