外泌體的提取,、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化,。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識(shí)別，這使得提取的外泌體純度高,，但是產(chǎn)量低,。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白,，結(jié)果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix,、CD9,、CD63)，同時(shí),，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。開(kāi)封外泌體提取試劑銷(xiāo)售廠家

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外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）,，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻,，置于冰上,。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程，包括除雜,、濾膜過(guò)濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）,、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定。來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中

在這項(xiàng)新的研究中,，經(jīng)過(guò)基因修飾的外泌體（被稱(chēng)作iExosome）能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,，增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱(chēng)作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運(yùn)送小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA）分子來(lái)靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,，這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞（包括病細(xì)胞）中,。外泌體提取：尺寸排阻色譜,。尺寸排阻色譜是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子,。

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱(chēng)TEM,，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱(chēng)NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測(cè)速度快，檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè)：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9、CD63和CD81,；細(xì)胞質(zhì)蛋白,，如肌動(dòng)蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；使用可截留100KD分子量的膜,，通過(guò)離心截留上清中的外泌體,，截留完成后外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,。南昌外泌體提取試劑廠家推薦

在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。開(kāi)封外泌體提取試劑銷(xiāo)售廠家

外泌體的提取、分離方法：聚合物沉淀法,。聚合物沉淀法用于分離病毒和其他的生物大分子已有50多年歷史,，近幾年，將其作為一種新的方法來(lái)分離外泌體,。目前,，市場(chǎng)已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒，較常見(jiàn)的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,，該試劑盒操作簡(jiǎn)單不需要特殊的儀器,，但是價(jià)格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過(guò)夜，之后再低速離心,。開(kāi)封外泌體提取試劑銷(xiāo)售廠家

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