由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),,穩(wěn)定性高,,不易降解,,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷、用藥監(jiān)控,、預(yù)后判斷。近年來,,隨著人們對(duì)外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深,,外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測(cè),;如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液,、唾液,、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA,、以及miRNA),,在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。珠海外泌體提取試劑廠家
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,,費(fèi)事費(fèi)力,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來說,,更是極為不請(qǐng)便,,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦也可以作為治病手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病,。
這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層,外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,,通過分析外泌體的組分,,可以幫助識(shí)別其來源的細(xì)胞類型。
外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),,直徑約為30-150nm,,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液,、唾液,、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中,。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè),。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA,、lncRNA,、mRNA、tRF等),、蛋白和脂類,,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞,、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用,。同時(shí)對(duì)超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本,。
外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá),,目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,,參與一些病癥的形成和演化過程。單個(gè)miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個(gè)mRNA結(jié)合,,從而阻滯整個(gè)生物通路,。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì),。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),,與75例健康者相比,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA(miR-25和miR-223),。Rabinonowits等對(duì)27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個(gè)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了評(píng)估,,結(jié)果顯示,12個(gè)一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達(dá),。Cazzoli等收集了30個(gè)血漿樣本,,發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA(miR-378a、-379a,、-139-5p,、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908。離心除去細(xì)胞器,,留取上清,。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠,、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。徐州外泌體提取試劑價(jià)格
外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心),。珠海外泌體提取試劑廠家
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣,;無需耗時(shí)的超速離心,,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,,也無需過夜培養(yǎng),;無需蛋白酶處理;適用于多種物種,;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白,;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評(píng)估近似外泌體大小范圍和濃度,。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。珠海外泌體提取試劑廠家
蘇州君欣生物科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),,發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大,。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工,為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長(zhǎng)空間,,為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù),,深受員工與客戶好評(píng)。蘇州君欣生物科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動(dòng)物疾病模型,,堅(jiān)持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,,贏得廣大客戶的支持和信賴,。公司深耕原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,,動(dòng)物疾病模型,,正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間,、更寬泛的領(lǐng)域拓展,。