具體實(shí)施方式實(shí)施例1止血材料的制備1,、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?.2%0.2%,。余量為水,。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板,,-40°C預(yù)凍池,,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,,干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血,。實(shí)施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料,。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%,余量為水,。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板,-20°C預(yù)凍,,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h,,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,,干燥保存。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。昆明正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家
膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,,其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋,。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,,并側(cè)向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數(shù)千埃),。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū),這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。青島正規(guī)鼠尾膠原膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項(xiàng):在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,,在操作過程中要盡量保持低溫,。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外)才能完成生長過程,,而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個(gè)時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用,。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,細(xì)胞就能更好地貼附上去,,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長,。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
鼠尾膠原,,10mg包裝,,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,,容量瓶配制比較準(zhǔn)確,。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準(zhǔn)確),,加入盛膠原的瓶中,,輕輕顛倒,不要震蕩,,蛋白容易起泡,。幾分鐘即可,,蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,,比青霉素瓶大點(diǎn)的就行,。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,,避免加入氣泡,。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進(jìn)EP管中,。用封口膜封口,,4度保存,勿冷凍,。可直接或間接參與細(xì)胞的附著,。上海鼠尾膠原
鼠尾膠原醋酸溶解:在2-8度中放置過夜,。昆明正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優(yōu)點(diǎn):1、本發(fā)明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產(chǎn)效率,,同時(shí)避開了使用其他設(shè)備帶來的成本上升問題,。2、本發(fā)明專利生產(chǎn)的止血材料(止血海綿),,其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其具有非常好的止血效果,。也可應(yīng)用于內(nèi)臟出血。具有廣闊的應(yīng)用前景,。3,、本發(fā)明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,與出血?jiǎng)?chuàng)面一接觸,,其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血?jiǎng)?chuàng)面上,,外面則形成連續(xù)的壓迫干層。啟動(dòng)凝血因子,。同時(shí),,聚乙烯醇為成膜材料,兩種的協(xié)同效應(yīng)形成了一種理想的止血狀態(tài)和結(jié)構(gòu),。昆明正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家