人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,,包括內皮細胞、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,,外泌體可通過其攜帶的蛋白質,、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,,進而啟動靶細胞細胞內的信號通路,。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,,從而啟動細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA,。獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,耗時,。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體,,是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,,直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應外泌體提?。壕垡叶迹≒EG)為常用的多聚物,,可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀。
外泌體的提取方法學規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,,費事費力,而且步驟多導致實驗中容易污染,,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細胞上清來說,,更是極為不請便,,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點,,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實驗也有影響,。
在這項新的研究中,,經過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解,,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活,。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中。外泌體的提取,、分離方法:聚合物沉淀法,。
外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,可通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成多泡內涵體,,內涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA,、蛋白質,、microRNA、DN段等多種物質,,存在于血液,、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,所以才被排出來,,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞,。如今,研究已經發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展,、神經細胞信號轉導過程中都發(fā)揮著重要作用。外泌體提?。撼叽缗抛枭V可以精確分離大小分子,。長沙外泌體提取試劑價格
外泌體的提取方法:密度梯度離心。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷
1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷