使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.細(xì)胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml）,，使做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度在30-50%,；如果細(xì)胞是原代細(xì)胞，接種密度可以密一些,，細(xì)胞計數(shù)在2*10^6cell/ml,；懸浮細(xì)胞可以在轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度30-40%,。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做,，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可,。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對應(yīng)的孔板即可~它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長,。天津原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷

原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法：1.當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時需要傳代培養(yǎng),。2.提前準(zhǔn)備好多聚賴氨酸（PLL，貨號0403）或纖維粘連蛋白（BPF,，貨號8248）包被好的培養(yǎng)瓶,。3.將完全培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E,，貨號0103）,，胰胰中和液（TNS，貨號0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基,。4.用DPBS沖洗細(xì)胞,。5.以T-75培養(yǎng)瓶為例，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS,，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液,。輕輕搖動培養(yǎng)瓶保證細(xì)胞被胰酶/EDTA消化液完全覆蓋。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細(xì)胞變圓,。在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,。6.在消化期間，準(zhǔn)備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS,，貨號0500）,。無錫原代細(xì)胞分離試劑盒銷售廠家如果接種的細(xì)胞密度過低，細(xì)胞之間的促生長作用很小,。

原代細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)及作用：1.細(xì)胞質(zhì)（Cytoplasm）細(xì)胞膜包著的黏稠透明的物質(zhì),叫做細(xì)胞質(zhì),。在細(xì)胞質(zhì)中還可看到一些帶折光性的顆粒,這些顆粒多數(shù)具有一定的結(jié)構(gòu)和功能，類似生物體的各種部位,，因此叫做細(xì)胞器,。例如,在綠色植物的葉肉細(xì)胞中，能看到許多綠色的顆粒,，這就是一種細(xì)胞器,，叫做葉綠體。綠色植物的光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,。2.細(xì)胞核原代細(xì)胞質(zhì)里含有一個近似球形的細(xì)胞核（nucleolus）,是由更加黏稠的物質(zhì)構(gòu)成的,。細(xì)胞核通常位于細(xì)胞的，成熟的植物細(xì)胞的細(xì)胞核,，往往被液泡推擠到細(xì)胞的邊緣,。細(xì)胞核中有一種物質(zhì)，易被洋紅,、蘇木精,、甲基綠等堿性染料染成深色，叫做染色質(zhì)（chromatin）,。生物體用于傳種接代的物質(zhì)即遺傳物質(zhì),，就在染色質(zhì)上。細(xì)胞核的機(jī)能是保存遺傳物質(zhì),，控制生化合成和細(xì)胞代謝,，決定細(xì)胞或機(jī)體的性狀表現(xiàn)，把遺傳物質(zhì)從細(xì)胞（或個體）一代一代傳下去,。但細(xì)胞核不是孤立的起作用,，而是和細(xì)胞質(zhì)相互作用,、相互依存而表現(xiàn)出細(xì)胞統(tǒng)一的生命過程。細(xì)胞核控制細(xì)胞質(zhì),；細(xì)胞質(zhì)對細(xì)胞的分化,、發(fā)育和遺傳也有重要的作用

原代細(xì)胞與細(xì)胞系：原代細(xì)胞來源于或是新近死亡的供體，通過機(jī)械或酶方法解離獲得,，其方案根據(jù)來源物種（例如人,，小鼠）和所涉及的組織類型而變化。通常包含以下步驟：組織切割和切碎,，酶解,，反復(fù)洗滌，研磨和微濾分餾,，較后重新懸浮和接種收集的細(xì)胞群,。對于松散的、被纖維結(jié)締包圍的組織,，機(jī)械均質(zhì)化可能足以進(jìn)行解離,。如果您的組織來源是外周血，差速離心便可以分離目的細(xì)胞,。由于與細(xì)胞分裂相關(guān)的染色體端?？s短，原代細(xì)胞在體外的壽命有限,。大約20到60次分裂后,，端粒變得太短而無法承受另一個循環(huán)，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止,。這種現(xiàn)象被稱為Hayflick極限,。對于具有無限倍增能力的細(xì)胞系，必須通過細(xì)菌或化學(xué)誘導(dǎo)方法的轉(zhuǎn)化使其永生化,。細(xì)菌對于細(xì)胞的基因編輯引入有效促進(jìn)增殖的基因（例如SV-40，E6,，E7）,，允許細(xì)胞無限的細(xì)胞分裂1。同樣地,，化學(xué)誘導(dǎo)方法（例如電離輻射，氯化鎳,，苯并芘）改變原代細(xì)胞的基因組成,，也可實(shí)現(xiàn)無限增殖。用70％的酒精沖洗凍存管,，然后擦去多余酒精,。

使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.細(xì)胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml）,，使做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度在30-50%；如果細(xì)胞是原代細(xì)胞,，接種密度可以密一些,，細(xì)胞計數(shù)在2*10^6cell/ml；懸浮細(xì)胞可以在轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml）,，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度30-40%,。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做,，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可,。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對應(yīng)的孔板即可必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài),?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)。徐州昆明原代細(xì)胞分離試劑盒

原代細(xì)胞來源于或是新近死亡的供體,，通過機(jī)械或酶方法解離獲得,。天津原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：轉(zhuǎn)染過程不可添加物品，否則會導(dǎo)致細(xì)胞死亡,；開始實(shí)驗(yàn)siRNA的用量設(shè)置在終濃度10nM,、30nM、50nM,、100nM進(jìn)行摸索,，后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修改。RFectPM可用來轉(zhuǎn)染siRNA,、antisenseRNA,、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,。對于大多數(shù)原代細(xì)胞,，RFectPM的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%,。RFectPM的使用也極其簡便,，先將sRNA與RFectPM室溫混合,，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞,，血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,。天津原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷