鼠尾膠原:1實(shí)驗(yàn)制備:實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料:大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作)。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。實(shí)驗(yàn)步驟:制備鼠尾膠原:1,、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘,;2,、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,,折斷尾骨后拉出尾腱,;3、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡,;4、重復(fù)步驟2,、3,,直至尾腱量夠用;5,、吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克)。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。鄭州鼠尾膠原廠家推薦
為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,要從它們身上取下足量的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。為了盡可能減少對動物的傷害和方便試驗(yàn)人員的操作,,剪下一小段鼠尾是一個不錯的選擇。就讓我們來盤點(diǎn)一下「耗子尾汁」的三種用法↓↓↓鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴,、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的「耗子尾汁」。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化,確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。比起心臟和眼部取血,,實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,,小鼠還能繼續(xù)下一步建?;蛘邔?shí)驗(yàn),完全沒有性命之憂,。廈門鼠尾膠原單價(jià)結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,。
使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被:以包被濃度為2μg/cm2為例,,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。開蓋在超凈臺上過夜晾干,,也可以在室溫放置1小時(shí)后,用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時(shí)間。2,、三維膠原凝膠的制備:A,、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時(shí)需要測定pH值),。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在說明書中給出了原因:“一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型,,之前多從牛皮,、豬皮、牛腱中提取,,但這類膠原蛋白不僅有油脂等其他雜質(zhì),,也存在著II型及其他一些膠原蛋白亞型;同時(shí),這種畜牧業(yè)大量飼養(yǎng)的動物存在著例如瘋牛病等一些生物性疾病及病毒,,如果用此開發(fā)醫(yī)用產(chǎn)品更加存在著品質(zhì)的不穩(wěn)定及潛在的風(fēng)險(xiǎn)及危害,。”至此,,想必“耗子尾汁”在知識產(chǎn)權(quán)界的名聲又亮了一些,。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:兩組培養(yǎng)皿中,,隨著過氧化氫濃度的增高,,均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,,細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性,。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下,,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱,,細(xì)胞存活率,、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低,。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,,其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力,減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān),。鼠尾膠原醋酸溶解:在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。鄭州鼠尾膠原廠家推薦
制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。鄭州鼠尾膠原廠家推薦
鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,,才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白,。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結(jié)構(gòu),可以用來當(dāng)作細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì),。細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外)才能完成生長過程,而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,,這個時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,,細(xì)胞就能更好地貼附上去,,除了培養(yǎng)皿,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長,。鄭州鼠尾膠原廠家推薦