細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)及常見問題解答：1,、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類而定。如果是從別的實(shí)驗(yàn)室借來的細(xì)胞,，較初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件,；特殊種類的細(xì)胞，比如內(nèi)皮細(xì)胞,，可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件,，添加一些特定成分。2,、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏,。小六兒見過有的大實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞量多，一次性購(gòu)買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多,，有些人可能覺得-20冰箱保存時(shí)間會(huì)更久一些,。但是經(jīng)過冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化,，顏色變深,，這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。3,、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺,，用來合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定,，保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺,。所以盡量不要大批量購(gòu)買培養(yǎng),，也不要一次配太多的培養(yǎng)基。貼壁細(xì)胞多來自部位組織,，而懸浮細(xì)胞多來自血液系統(tǒng)的細(xì)胞,。上海武漢原代細(xì)胞分離試劑盒

原代細(xì)胞培養(yǎng)的開始傳代：原代培養(yǎng)后由于懸浮細(xì)胞增殖，數(shù)量增加甚至達(dá)飽和密度;貼壁細(xì)胞的相互匯合,，使整個(gè)瓶底逐漸被細(xì)胞覆蓋,，細(xì)胞難以繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖，需要進(jìn)行分瓶培養(yǎng),，這種使原代細(xì)胞經(jīng)分散接種的過程稱之為傳代,。值得注意的是：每次傳代細(xì)胞在生長(zhǎng)和增殖方面受到一定的影響。開始傳代應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①細(xì)胞生長(zhǎng)密度不高時(shí),，不能急于傳代,。②原代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞需控制消化時(shí)間,。③吹打已消化的細(xì)胞應(yīng)減少機(jī)械損傷,。④開始傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些。⑤開始傳代培養(yǎng)的pH應(yīng)偏低些,。小牛血清濃度可加大至15%～20%左右,。無錫正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒單價(jià)細(xì)胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度,。

原代細(xì)胞應(yīng)用困局：經(jīng)過一次傳代后,，原代細(xì)胞培養(yǎng)物就會(huì)成為二級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)物，也稱為細(xì)胞株,。然而,，盡管稱為細(xì)胞株，但其壽命是有限的（除非如前所述永生化）,。這種有限的分裂能力體內(nèi)的細(xì)胞相似,，一旦細(xì)胞在體內(nèi)完全分化以發(fā)揮其特殊功能，細(xì)胞將停止增殖-這是固有的保護(hù)性衰老過程,。此外,，某些原代細(xì)胞有絲分裂后，無論是在體內(nèi)或體外培養(yǎng)中都不增殖（例如,，神經(jīng)元,，骨骼肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞,，周細(xì)胞,，終末分化的肝細(xì)胞）。因此,，每次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后,，原代細(xì)胞培養(yǎng)都需要再次從新鮮的組織中解離,。

原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，多久更換一次培養(yǎng)基這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度,。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,，周三,，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。2,、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎,？這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞,，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞,、星形細(xì)胞,、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等,，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存,。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變,。適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度,。

分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為：將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞(常用胰蛋白酶)，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長(zhǎng)和繁殖(注意整個(gè)過程無菌)。原代培養(yǎng)：當(dāng)采用外科操作的方法將細(xì)胞從有機(jī)體中分離下來,，然后置于合適的培養(yǎng)環(huán)境中,，它們會(huì)附著、分裂和生長(zhǎng),。這稱為原代培養(yǎng),。原代培養(yǎng)有兩種基本的方法?？壳胺N,，使用外植塊，將小片的組織粘附到玻璃或經(jīng)處理的塑料培養(yǎng)瓶中,，并浸于培養(yǎng)液中,。幾天之后,，單個(gè)細(xì)胞將從組織外植塊中移動(dòng)到培養(yǎng)瓶的表面或基質(zhì)中開始分裂生長(zhǎng)。第二種方法,，也是使用更普遍的方法,，通過在組織碎片中加入消化（蛋白水解）酶，如胰酶或膠原酶,，消化成團(tuán)聚集的細(xì)胞從而加快這一步驟,。得到單細(xì)胞的懸液，然后將其置于含有培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),，讓其繼續(xù)生長(zhǎng)分裂,。這種方法成為酶解。將凍存管立即從水浴中拿出,，擦干,，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。杭州正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒哪家便宜

給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物,。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液,。上海武漢原代細(xì)胞分離試劑盒

原代細(xì)胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀：原代細(xì)胞自然生長(zhǎng)有兩種方式，錨定依賴或非錨定依賴,，這主要取決于它們?cè)隗w內(nèi)的組織來源：外周血（非錨定依賴）或固體組織部位（錨定依賴）,。原代細(xì)胞一旦分離后,，24-48h內(nèi)需要進(jìn)行貼壁或起始,，開始培養(yǎng)。廣義地說,，所有的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，無論其類型或來源，都需要在與人類生理?xiàng)l件非常相似的條件下生長(zhǎng),。此外,，它們還需要一個(gè)pH可調(diào)節(jié)的生長(zhǎng)環(huán)境，并且培養(yǎng)基中需包含細(xì)胞類型特定的營(yíng)養(yǎng)因子,、生長(zhǎng)因子,、葡萄糖和/或物品。為了確定一種特定細(xì)胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)和功能所需的較低條件,，相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長(zhǎng)培養(yǎng)基必須包含的基本成分：胰島素,、轉(zhuǎn)鐵蛋白、葡萄糖和各種鹽,、維生素和氨基酸1,。然而，除此之外培養(yǎng)基也可以含有組織和細(xì)胞特異性細(xì)胞因子和增殖,、生存所需的生長(zhǎng)因子,。例如,，原代內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF），但是,，應(yīng)該添加額外的組織特異性因子,，以防止成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。上海武漢原代細(xì)胞分離試劑盒