酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學(xué)破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構(gòu)成細胞壁的蛋白質(zhì)、脂肪及糖的化合物得到水解,,從而破壞細胞壁,,此法對堿的濃度及提取溫度要求比較嚴(yán)格,,堿的濃度不可過濃,應(yīng)控制在1%,,并且對提取溫度也有一定的要求,,提取時間短。因為在過分劇烈的條件下,,容易使核糖核酸分子內(nèi)的酯鍵斷裂,,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,,是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究材料,。由于酵母菌的細胞壁成分復(fù)雜,且較原核生物厚,,難于破碎,,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細胞壁并保證RNA的完整性,,是獲得高質(zhì)量酵母菌總RNA的關(guān)鍵問題,??俁NA的提取方法還有很多,,如Trizol法、異硫氰酸胍法,、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法,、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法,、熱硼酸鹽法等,,這些方法各有優(yōu)缺點,不同的方法適用于不同類型的材料,。在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶 K,、溶菌酶等)。徐州RNA提取試劑產(chǎn)品介紹
RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,,Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個問題,。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖,、幼苗等),、富含多糖多酚的植物組織材料(果實、種子等),、菌類提取高純度的TotalRNA,,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA,。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑,。溫州濟南RNA提取試劑RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑,。
RNA提取:預(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品,。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,,如沒有開封使用過,通常不必再處理,。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強的劇毒物,,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過夜,。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘,。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用,。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時以上,。
細胞質(zhì)和細胞核RNA提取試劑盒特點:1.有效分離和提取細胞質(zhì)RNA,與細胞核RNA,。2.方便快捷的離心柱操作方式,。3.提取的RNA,品質(zhì)高,,產(chǎn)量多,。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含MicroRNA),。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,,包括RT-PCR,qRT-PCR,,RNA-Seq,,陣列等。6.細胞質(zhì)RNA不含DNA,,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR,。7.試劑盒可用于哺乳動物細胞或者組織樣品的提取,。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,,而不是總RNA,。例如,在一些表達譜研究中,,較好能夠提取成熟的細胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA,。或者,,在研究分析未剪接的RNA前體時,,提取細胞核(Nuclear)RNA會是一個更好的選擇。然而,,市面上絕大多數(shù)廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細胞質(zhì)與細胞核的RNA,,不僅費用高昂,而且浪費大量的材料與時間,。排除其它核酸分子(DNA)的污染,。
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個事實可能會刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實驗支持:經(jīng)典Trizol法會選擇性丟失低GC比的miRNA,。這一點,,源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學(xué)家,,專做RNA相關(guān)的研究,,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個奇怪的“現(xiàn)象”,,即貼壁細胞在消化之后,,會有一些miRNA的豐度突然降低,,看起來好像是被快速“降解”掉了,,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),,這個“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實驗,,就一定是陽性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,,就重復(fù)不出來,。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實如此,。經(jīng)進一步實驗后發(fā)現(xiàn),,經(jīng)典的Trizol方案會使得低GC比的miRNA丟失。RNA提取試劑注意事項:TRIReagent抽提總RNA的同時,,理論上也可抽提蛋白和DNA,。蘇州RNA提取試劑哪家好
RNA在260nm波長處有較大的吸收峰,。徐州RNA提取試劑產(chǎn)品介紹
植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅固的植物細胞并強烈壓制RNA酶活性,。細胞破碎之后,,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨特的成分結(jié)合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶,、蛋白,、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物,。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,,并清理殘余的多糖。提取可在60分鐘內(nèi)完成,,所提取的RNA純度極高,,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于構(gòu)建cDNA文庫,、RT-PCR,、Northern轉(zhuǎn)印分析、Poly(A)mRNA純化,、體外翻譯,、和RNA酶保護實驗。適于各種植物組織RNA提取,,也特別適合富含糖原的動物肝臟和肌肉組織提取高純度RNA,。如果植物組織富含多酚和次生代謝產(chǎn)物,推薦使用PlantRNAExtractionkit(R1050),。徐州RNA提取試劑產(chǎn)品介紹