外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法,。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原,、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化,。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,，這使得提取的外泌體純度高，但是產(chǎn)量低,。Zarovni等分別用超速離心,、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白,，結(jié)果表明,，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9,、CD63),，同時，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。多聚物沉淀法早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體。廣州外泌體提取試劑報價

研究中研究人員發(fā)現(xiàn),，胃病細(xì)胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征，并促進(jìn)胃病細(xì)胞在體外和體內(nèi)的遷移,。此外,，研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導(dǎo)的遷移活動。通過使用質(zhì)譜方法,，研究人員確定載脂蛋白E（ApoE）是M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì),。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì)，是決定胃病細(xì)胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素,。然而,，來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細(xì)胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細(xì)胞的遷移沒有顯著影響。在機(jī)制上,，M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體介導(dǎo)ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,，并在TAM和受體胃病細(xì)胞之間進(jìn)行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，促進(jìn)細(xì)胞骨架的遷移,?？偟膩碚f，該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導(dǎo)的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細(xì)胞,，促進(jìn)了胃病細(xì)胞的遷移,。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價外泌體的提取方法：超濾離心,。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時，對離心時間極為敏感,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,，這種操作簡單,、省時，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,，耗時,，量少。四是免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實驗,。五是PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍,。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。

這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,，也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層,，外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷（應(yīng)用潛能）：外泌體生成機(jī)制表明,，通過分析外泌體的組分，可以幫助識別其來源的細(xì)胞類型,。靜置10～15分鐘,，留取沉淀物備用,。廣州外泌體提取試劑報價

機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。廣州外泌體提取試劑報價

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中，包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細(xì)胞間通訊,，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。廣州外泌體提取試劑報價