外泌體與神經(jīng)退行性疾病：外泌體可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷（應(yīng)用潛能）：外泌體生成機制表明，通過分析外泌體的組分,，可以幫助識別其來源的細胞類型,。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,，也在肝腎肺相關(guān)疾病中進行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層,。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價

外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法,；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力,，從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結(jié)果顯示,，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者,。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準(zhǔn)備過程,，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì),。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比,，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體,。但是，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細菌,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。

外泌體的提取分離：1,、超速離心法（差速離心）,。超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心,、高速離心交替進行（如圖所示）,，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑,；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。2、密度梯度離心,。在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時。

外泌體（exosome）,，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞,、淋巴細胞,、樹突狀細胞、瘤細胞,、間充質(zhì)干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要。

外泌體在肺病進程中的作用：肺病細胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長,。據(jù)相關(guān)報道稱,，LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進一些病癥血管的生成,；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用,。此外，有研究發(fā)現(xiàn),，外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）,。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加，促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT，從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖,，遷移能力,。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價

用于外泌體提取的體液收集注意事項：抽血技巧,。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價

外泌體的形成與鑒定：首先，細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu),，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白,，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成,，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合,；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體),。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,，這一過程導(dǎo)致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白,、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后,。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價