鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色;礦化2d后,,膠體的顏色逐漸加深至乳白色,;礦化6d后,,隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部,,膠體顏色加深至純白色,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,,予鑷子夾起,,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示:礦化2d后,,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部,膠原纖維部分礦化,,沿著膠原纖維生長,,忖度變深;礦化6d后,,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,,膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,嵌入膠原纖維縱向生長,。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時,,由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),膠原纖維呈現(xiàn)黑色,,選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。制備鼠尾膠原:吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克),。蘇州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價
實驗應(yīng)用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,,培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),,應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開,;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的,;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。合肥鼠尾膠原報價鼠尾膠原醋酸溶解:在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,。實驗設(shè)備及材料:大鼠尾巴,、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實驗內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作),。2、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,,75%酒精浸泡5分鐘,;2、手持尾巴,,用止血鉗夾住鼠尾的,,折斷尾骨后拉出尾腱;3,、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡;4,、重復(fù)步驟2,、3,直至尾腱量夠用,;5,、吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克),;6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,;7、按每克尾腱50ml的比例,,加入0.1%醋酸溶液,;8、搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置一星期;9,、離心,,4000轉(zhuǎn)/分,10-15分鐘,;10,、吸取上清,分裝成小瓶,,4℃保存,。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。
鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率,。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的,。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。制備鼠尾膠原:搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置一星期。無錫鼠尾膠原服務(wù)電話
鼠尾型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。蘇州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外)才能完成生長過程,而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,,細(xì)胞就能更好地貼附上去,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提蘇州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價