由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,，使得它具有潛在的應(yīng)用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,，另一方面也可以作為治病手段,，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要,。據(jù)了解，目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細胞因子,、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),，在體內(nèi)參與細胞通訊,、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān),。外泌體提取：超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,。鄭州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。2、多聚物沉淀法,。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物,，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等正規(guī)外泌體提取試劑進貨價重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。

外泌體的提取的方式：1,、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高,、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進行下一步的實驗。2,、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。

外泌體的形成與鑒定：首先,，細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu),，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome,，ESE)的從頭形成,，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs,。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體),。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,，這一過程導(dǎo)致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白,、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后,?？蓪⑼饷隗w吸附并分離出來。

由于這些核酸被囊膜包裹而被保護,，穩(wěn)定性高,，不易降解，是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標記物一些疾病的早期診斷,、用藥監(jiān)控,、預(yù)后判斷。近年來,，隨著人們對外泌體的研究和認識加深,，外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測,；如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液,、腹水,、胸腹水等)和細胞液中快速提取的，其是活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體,，含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA、以及miRNA),，在體內(nèi)細胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。外泌體的提取分離：超濾離心。廈門外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家

將人尿液來源細胞的培養(yǎng)基通過0.22微米濾膜過濾,，以去除大的細胞殘片以及其它雜質(zhì),。鄭州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體與免疫系統(tǒng)：不同的細胞來源的外泌體，包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞),、病細胞,、上皮細胞和間充質(zhì)細胞，釋放出帶有載體的外泌體,，可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性,。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響，刺激或壓制其增殖和功能,。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān),；體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用,。鄭州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨