實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,，培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測(cè)量纖毛擺動(dòng)頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,，平均厚度約為1mm,；HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接,；同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,，為今后研究鼻內(nèi)用藥對(duì)纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑,。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,。南昌正規(guī)鼠尾膠原哪家便宜

含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。溫州鼠尾膠原單價(jià)I型膠原蛋白分布非常普遍,，是主纖維束的主要成分,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理，收集上清液,；在冰水浴中,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差，一碰即散,。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE,，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2),。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL,。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2,、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察,。在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中,。

鼠尾膠原簡(jiǎn)介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備，純度達(dá)到95%以上,，可溶于0.006mol/L乙酸,。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠,，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1,、SDS-PAGE分析純度大于95%,。2、無菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性,。3,、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞，貼壁及生長(zhǎng)正常,。4,、本品濃度1mg/mL，pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠,，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長(zhǎng)正常,、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長(zhǎng)正常。鼠尾膠原,，是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。成都正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價(jià)

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,。南昌正規(guī)鼠尾膠原哪家便宜

鼠尾膠原蛋白的用途是什么：在工業(yè)應(yīng)用方面，鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥,。它還可以用來制造一種凝膠，可當(dāng)作懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基,。此外,，還可以把它當(dāng)膠水使用。在化妝品行業(yè),，鼠尾膠原蛋白可當(dāng)作沐浴液和肥皂中的凝膠,。它還用于生產(chǎn)能減少皺紋和改善皮膚質(zhì)量的面霜或護(hù)膚霜。不過,，用于撫紋,，或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從?；蜇i提取。不過,，用于撫紋,，或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取,。南昌正規(guī)鼠尾膠原哪家便宜