具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進(jìn)行,，1、300×g10min，棄沉淀,，去除細(xì)胞2,、2000×g20min，棄沉淀,，去除死細(xì)胞3,、10,000×g30min，棄沉淀,，去除細(xì)胞碎片等亞細(xì)胞成分4,、10,000×g70min，棄上清,，沉淀即為外泌體5,、PBS（每10ml細(xì)胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻,，10,000×g70min6,、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?,、一般超速離心法會結(jié)合密度梯度離心,，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心,，10,000×g70min,，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點是：成本低,，操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)較多。缺點是：耗時耗力（需用時8-30h,，并且每次只能處理6個樣本）,，獲得的外泌體純度不是很高，高速及重復(fù)離心也會對外泌體產(chǎn)生很大的傷害,，并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本,。嚴(yán)重阻礙了我國在外泌體的研究和臨床應(yīng)用上的發(fā)展。重慶外泌體提取試劑

外泌體在肺病治病中的作用：有研究發(fā)現(xiàn),，使用外泌體運載紫杉醇（PTX）可顯著提高病細(xì)胞對PTX的吸收,，將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性，Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展,。Aqil等在進(jìn)行裸鼠實驗時發(fā)現(xiàn),，加載至外泌體中的雷公藤紅素（Exo-CEL）比普通的CEL有更強(qiáng)的抗一些病癥功效，且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,，由此可以證明,，外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性,。到目前為止，外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,，有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點的探索,。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景，期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破,，造福更多的患者,。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。太原外泌體提取試劑哪家便宜外泌體提?。好庖叻蛛x技術(shù),。

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA,、蛋白質(zhì),、microRNA、DN**段等多種物質(zhì),，存在于血液,、唾液、尿液,、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,，所以才被排出來,，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今,，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng),。

外泌體的提取方法：1、色譜法,。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,，首先被流動相洗脫出來,；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強(qiáng)地滯留,，更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍,。2、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要。

外泌體提?。撼叽缗抛枭V,。尺寸排阻色譜（Size-exclusionchromatography，SEC）是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子,。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,，分子根據(jù)其直徑通過微球，半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫,。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,，可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法,。與離心方法相比，色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,，這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前,，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù),。不過，該方法耗時較長,，不適合大量樣本處理外泌體的提取分離：PEG-base沉淀法,。南京外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

外泌體提取：樣本的粘度與分離的外泌體純度有顯著的相關(guān)性,。重慶外泌體提取試劑

外泌體（exosome）,，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞,、瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時,，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子重慶外泌體提取試劑