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外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體,,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來(lái)源普遍,,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,,腹水,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。超離法因操作簡(jiǎn)單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定,,純度也受到質(zhì)疑,。同時(shí)對(duì)超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本。太原外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來(lái)眾多文獻(xiàn)報(bào)道,,肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展,,是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn),,NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽(yáng)性的占80%,,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽(yáng)性的只占2%,因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物,。Park等通過(guò)Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì),,進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物,。近幾年來(lái),,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。溫州正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法。
外泌體提取:1,、過(guò)濾,。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小,,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體,。較常見的過(guò)濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,,可用于收集大于800nm,、400nm或200nm的外泌體,也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體:不過(guò),,該方法由于過(guò)濾膜的粘附,,可能會(huì)損失外泌體,并且過(guò)濾時(shí)的壓力和剪切力,,可能會(huì)使外泌體變形受損,。2、基于聚合物的沉淀技術(shù),?;诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃溫育并低速離心,。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG),。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn),包括對(duì)分離的外泌體影響小,、pH中性等,。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物(包括脂蛋白)而且,,聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析,。
外泌體提取:尺寸排阻色譜,。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,,SEC)是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,,分子根據(jù)其直徑通過(guò)微球,,半徑小的分子需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能通過(guò)色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫,。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。此外,可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法,。與離心方法相比,,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì),,因?yàn)橥ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,,這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù),。不過(guò),,該方法耗時(shí)較長(zhǎng),不適合大量樣本處理外泌體提?。壕垡叶迹≒EG)為常用的多聚物,,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。
大量關(guān)于一些病癥相關(guān)巨噬細(xì)胞的研究表明,,一些病癥相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)與一些病癥細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞間通訊,,與一些病癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān),然而對(duì)TAM與一些病癥細(xì)胞之間通信的研究限制于可溶性因子,,例如促炎細(xì)胞因子,,其中包括趨化因子、炎癥因子和生長(zhǎng)因子等,。較近的研究證據(jù)表明,,外泌體是一些病癥微環(huán)境中不同細(xì)胞類型之間的重要通訊媒介。外泌體將信息從一個(gè)細(xì)胞傳遞到另一個(gè)細(xì)胞并重編程受體細(xì)胞,。目前大部分研究都集中在一些病癥細(xì)胞分泌的外泌體,,關(guān)于TAM衍生的外泌體及其對(duì)治病細(xì)胞的影響知之甚少。TAM具有兩種相反的表型:M1亞型巨噬細(xì)胞具有抗一些病癥作用,,M2型巨噬細(xì)胞具有致瘤作用活性,。TAM的表型由特定的一些病癥來(lái)源的趨化因子和外泌體調(diào)節(jié)。較近的一項(xiàng)研究表明,,一些病癥來(lái)源的外泌體miRNA調(diào)節(jié)一些病癥促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞的極化,。然而,TAM衍生的外泌體對(duì)一些病癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)尚未明確定義,。目前,,TAM的外泌體概況仍然大部分未知,并且TAM衍生的外泌體對(duì)于一些病癥進(jìn)展在功能上是否必需還未確定,。外泌體提?。夯诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合。金華正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
通過(guò)密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。太原外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,,這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問(wèn)題,。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,,耗時(shí),量少,。,、太原外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)