細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗,。細胞凍存的原理：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基,、血清,、DMSO。太原正規(guī)無血清細胞凍存液供應(yīng)商

無血清細胞凍存液：解凍解凍后,，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中,。上述凍存的一管細胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前,，提前準備好以下材料：試管,，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基，預(yù)先包被的培養(yǎng)板,，確保整個解凍復(fù)蘇程序可以在較短的時間內(nèi)完成,。注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基,。2.在37°C水浴中快速解凍，持續(xù)溫和的在水中晃動凍存管,，直到剩余少量細胞還處于凍存狀態(tài),。3.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌,。4.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉(zhuǎn)移到一個15mL的錐形試管,。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細胞聚集體的分解。蕪湖正規(guī)無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價含血清,，細胞污染(細菌,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險更高。

細胞凍存注意事項：1,、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,，但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時,，要做好防護工作，以免凍壞;3,、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液,。4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套,，護目鏡,。此項特別重要，細胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,，可導(dǎo)致炸列。凍存液產(chǎn)品針對細胞凍存的特殊配方,，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,，有效提高細胞復(fù)蘇率和活力。

無血清細胞凍存液與傳統(tǒng)細胞凍存液比較及優(yōu)勢：1.傳統(tǒng)細胞凍存液只適用于含血清細胞的凍存,，但并不適用于無血清培養(yǎng)的細胞,，例如一些CIK細胞等，而無血清細胞凍存液即適用于含血清細胞的凍存,，又適用于無血清細胞的凍存,，是一種通用型細胞凍存液，通用于各種動物細胞株,；2.傳統(tǒng)細胞凍存液含10%胎牛血清，因血清是動物源性成份,，因此病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險很高,，而無血清細胞凍存液因不含血清，只含DMSO,、葡萄糖等營養(yǎng)成份,，較大降低了動物血清來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險,，確保凍存細胞的安全,；3.傳統(tǒng)細胞凍存液含血清，但動物血清成分復(fù)雜,，個體差異大,，且生產(chǎn)來源不穩(wěn)定，因此批次間質(zhì)量常常不穩(wěn)定,，這導(dǎo)致培養(yǎng)細胞的狀態(tài)也會受到影響,，而無血清細胞凍存液成分和配比明確，批次間差異很小,，能夠保證生長細胞狀態(tài)的穩(wěn)定性,，細胞存活率高。無血清凍存液使用方法：收集懸浮細胞或貼壁細胞,，離心去除上清培養(yǎng)液,。

細胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、有文獻表明,，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因為這一速度可以很好的控制細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min,、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。2、正常情況下,，經(jīng)過-20℃1h30min這一步后,，凍存管內(nèi)的細胞已經(jīng)處于凝固狀態(tài)，如果此時凍存管內(nèi)還是液體,，很可能是DMSO或冰箱冷凍功能出現(xiàn)了問題,。如若遇到這種情況，不能因為時間到了,，就把把液體狀態(tài)的凍存管放置到液氮中,，可以適當(dāng)延長在-20℃環(huán)境下的冷凍時間30-60分鐘，直至凍存液凝固后再放到液氮中,。無血清快速細胞凍存液：減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細胞安全。蕪湖正規(guī)無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價

無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液供應(yīng)商

細胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項：1、液氮內(nèi)的細胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細胞應(yīng)一段時間內(nèi)進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后，可復(fù)蘇一管新的細胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種。2,、細胞復(fù)蘇時,，為保證獲得較高的存活率和接種率，應(yīng)盡可能的快速完成復(fù)蘇,，以避免在升溫過程中細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。書面介紹的復(fù)蘇溫度是37℃-42℃，但是本人在實際操作中發(fā)現(xiàn)40℃環(huán)境下復(fù)蘇效果較好,。3.復(fù)蘇時使用的培養(yǎng)基和凍存時使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液供應(yīng)商