外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞,、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。外泌體提?。捍胖榉ň哂刑禺愋愿摺⒉僮骱啽?、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷
在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進行稀釋,,然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片,,制成體液樣本備用;體液樣本純化:通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,,進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì),,靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用,;外泌體提?。簩⑸鲜龀恋砦镉肞BS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,,然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,,置于80℃儲存?zhèn)溆谩4颂崛》椒l件復雜,,成本高,專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來,;根據(jù)外泌體表面的特異生物化學特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。
外泌體提?。撼叽缗抛枭V,。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應用填充多孔聚合物微球的柱子,,分子根據(jù)其直徑通過微球,,半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫,。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。此外,可以將不同的洗脫溶液應用于該方法,。與離心方法相比,,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,,這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu),。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù),。不過,,該方法耗時較長,不適合大量樣本處理
外泌體的提取的方式:1,、免疫磁珠法,,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,,不便進行下一步的實驗,。2、PS親和法,,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,,獲得的外泌體形態(tài)完整,,純度較高。由于不使用變性劑,,不影響外泌體的生物活性,,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),,表明PS法可提取相當高純度的外泌體,。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設備,,應用不普遍,。在體內(nèi)細胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導中起到重要作用。
腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,,放入離心管中加上消化液進行消化,,經(jīng)水浴、反復輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,,置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜,、濾膜過濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深,。北京外泌體提取試劑直銷廠家
人尿液來源細胞的外泌體的獲取方法,是首先分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基,。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷
近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域、醫(yī)學基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體來源及內(nèi)含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體,同時外泌體也普遍存在于體液中,,包括血液,、眼淚、尿液,、唾液,、乳汁、腹水等,。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA,、lncRNA、circRNA,、mRNA,、tRNA等)、蛋白,、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81,、CD9,、TSG101、HSP27等,。外泌體鑒定,。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM)、Nanosight,、WesternBlot,、流式細胞術(shù)。蕪湖外泌體提取試劑廠家直銷