以前在另一家實驗室的時候，凍存細(xì)胞根本就沒有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作,。凍存的細(xì)胞有293T,、PT67,、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）,、HelaS3,、HelaD、U2OS,、HKC,、RK3E、ECO,、H292,、HSY、COS7,、SupT1等,。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0),，直接放在-80℃冰箱,。兩三天后移入液氮中，較久保存,，幾年后細(xì)胞的活力仍沒有什么受損,，照常能復(fù)蘇，成活率高,。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長狀態(tài)要好,，不能長得過稀，同樣也不能過密,，細(xì)胞的狀態(tài)看起來相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長24h才能全滿,，萬一細(xì)胞狀態(tài)不好,，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心,，不能太密也不能太稀,，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時間不能過長,，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里,。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性,，但一年的細(xì)胞就沒有活的。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：可培養(yǎng)板整板凍存,，例如雜交瘤細(xì)胞凍存時可節(jié)省篩選過程,。金華正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家現(xiàn)貨

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍速融,，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力,。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷,，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH,，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡,。細(xì)胞凍存液除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液.細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦開始原代培養(yǎng),，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要,。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久,；細(xì)胞儲存在液氮中，溫度達(dá)-196℃,，理論上儲存時間是無限的。上海正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液平均價格無血清細(xì)胞凍存液：降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,，減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,。

無血清細(xì)胞凍存液：采用patent的凍存配方,，用包括重組人血白蛋白等多種蛋白組分替代了血清的用途,。用包括DMSO在內(nèi)的復(fù)合凍存保護(hù)劑替代了單一的DMSO的保護(hù)作用。復(fù)合保護(hù)劑的內(nèi)部保護(hù)劑,，易于穿透細(xì)胞膜，避免在細(xì)胞凍存過程中細(xì)胞內(nèi)部的水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,；外部保護(hù)劑,，可在溶液形成冰晶之前，在細(xì)胞膜外部競爭性的結(jié)合細(xì)胞膜表面的水分子,，從而降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,，減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量。在細(xì)胞內(nèi)部與外部的協(xié)同保護(hù)作用下,，明顯降低了溫度迅速下降與溫度上升對細(xì)胞的損害，因此大幅度提高了細(xì)胞經(jīng)過凍存后的復(fù)蘇存活率,。

凍存細(xì)胞注意事項：冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點(diǎn),，并可減緩冷卻速度，較大降低冰晶形成的危險(冰晶可損傷細(xì)胞,，導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。注：DMSO可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織,。操作含DMSO的試劑時，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范,，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。建議可使用廠商生產(chǎn)的無血清細(xì)胞凍存液,，使用方便，復(fù)蘇率高,。注意冷凍保護(hù)劑DMSO的品質(zhì)：DMSO應(yīng)為試劑級等級,，無菌且無色，以5-10ml小體積分裝,，4℃避光保存，勿作多次解凍快速凍存簡化了凍存步驟,，同時不需要使用梯度凍存盒,。

無血清細(xì)胞凍存液復(fù)蘇細(xì)胞實驗步驟：1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm,，4℃,，3~5min），移去上清液,。4.清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液,。5.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液,。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中,。將要凍存的細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),，計數(shù)后離心,。南京正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液哪家便宜

無血清凍存液特性：不需回溫，完全即用型,。金華正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家現(xiàn)貨

細(xì)胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來,；4.離心1000rpm,，5min,；5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml,；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者,；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。金華正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家現(xiàn)貨