細胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。6.到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時~脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,。重慶正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

細胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用,，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附,，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。常用細胞類型：cos-7、BHK,、NIH3T3,、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔,。當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染,。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70%的細胞?，F(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑,，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。南京石家莊細胞高效轉(zhuǎn)染試劑細胞轉(zhuǎn)染是完成這一過程的必需步驟,。

細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa,，293,，CHO，COS7,，MCF－7,，HepG2等細胞，是否加血清,，對不同的細胞是有不同的影響的,，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響,。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細胞死亡,。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清

細胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細胞密度一般來說,，當細胞密度達到60%～80%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,，過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果。2.細胞生長狀態(tài)這點非常關(guān)鍵,，很多時候傳代次數(shù)太少或者太多都將導致細胞對轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變,。因此，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性,、降低細胞毒性,，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數(shù)的一致性,。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉(zhuǎn)染時所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的,，不能一種體系用在所有類型細胞的轉(zhuǎn)染實驗細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解,。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候,，較好不要換液,，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清,。過早的話，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長,。表達水平與位臵無關(guān),，不會受到周圍染色體元件的影響。昆明細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,。重慶正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

瞬時轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內(nèi)就結(jié)束了,。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質(zhì)粒表達和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率?？梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件,，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低,。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT）,，綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）,?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因,，轉(zhuǎn)染入真核細胞內(nèi)后可以直接表達bgal,。結(jié)合簡單的檢測步驟,，可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法。重慶正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好