細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異。因轉(zhuǎn)染試劑對細胞有毒害作用,，細胞太少,，容易死。一般轉(zhuǎn)染時,，貼壁細胞密度為70%-90%,，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,，確保轉(zhuǎn)染時細胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉(zhuǎn)染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細胞產(chǎn)量,。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細胞類型中可以獲得高表達活性,。同其他啟動子,，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比，在BHK-21中其活性較高,。這三種細菌啟動子在T細胞來源的細胞系,，如Jurkat中組成表達水平較低。轉(zhuǎn)染后在培養(yǎng)基中加入PHA-L和PMA可以啟動Jurkat細胞中CMV啟動子,，而單PMA就足以啟動KG1和K562(人骨髓瘤白細胞)中的CMV啟動子,。SV40啟動子的表達在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)時會提高，因為大T抗原可以刺激染色體外的合成,。這會導致和轉(zhuǎn)染相關的細胞行為的變化,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

細胞轉(zhuǎn)染，你至少要掌握以下幾點：胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導入真核細胞的技術,。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能,、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中,，其應用越來越普遍,?？煞譃樗矔r轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等,。瞬時轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達,，但通常只持續(xù)幾天,，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說,，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,，β半乳糖苷酶等來幫助檢測,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在,。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系,。開封正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨其它物理和化學介導的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點。

細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,，比如：HeLa，293,，CHO,，COS7，MCF－7,，HepG2等細胞,，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的,，有些細胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時加入,。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡,?？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清

如何高效率實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染：DNA轉(zhuǎn)染導入細胞胞漿內(nèi)的DNA不能穿過細胞核的核膜（"核屏障"）,。在細胞有絲分裂過程中核膜溶解，DNA進入細胞核才有可能,。為此,，細胞處于分裂期對DNA轉(zhuǎn)染是至關重要的，并且處于分裂期的細胞比例必須盡可能大才能實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染,。DNA轉(zhuǎn)染機制示意圖如下所示：轉(zhuǎn)染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)對于RNA轉(zhuǎn)染是沒有"核屏障"的,，因為RNA不需要進入細胞核發(fā)揮其生物學效應，因此細胞分裂對它沒有影響,。轉(zhuǎn)染試劑的選擇理想的轉(zhuǎn)染試劑選擇可以使您的實驗如虎添翼,！真核細胞的先天免疫系統(tǒng)，使它們能夠檢測外來物質(zhì)如脂多糖,、細菌或細菌核酸和蛋白質(zhì),，并克制潛在病原體的入侵。此外,，細胞通過信使分子向臨近細胞傳遞發(fā)現(xiàn)有害物質(zhì)的信號,。因此，這些臨近細胞甚至無需接觸病原體即可采取防御方式,。這種細胞先天免疫系統(tǒng)也是轉(zhuǎn)染成功的一個障礙,。當復合物接近細胞膜時,，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進入細胞,。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率,。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來,，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿,，以確保均勻分布和避免局部高濃度,。這些都是一些細枝末節(jié)，但是,，如果不注意的話,，也會造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細胞狀態(tài)不好細胞狀態(tài)不好,，會導致轉(zhuǎn)染效率低下,。一般進行轉(zhuǎn)染的細胞應該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細胞的話,，貼壁率應該在70-80%,；如果是懸浮細胞的話，應該是6X105個/孔（24孔板）,，一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液,，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細胞一次,。轉(zhuǎn)染的整個過程都不應該有物品。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進行細胞轉(zhuǎn)染,。開封正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

轉(zhuǎn)化,、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經(jīng)常碰到的,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年,，百思不得其解,。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后,，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的,，因為過了半年后，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加,，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡,。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候,，較好不要換液，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清。過早的話,，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷