細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：1.細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。因轉(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞有毒害作用,，細(xì)胞太少,，容易死。一般轉(zhuǎn)染時(shí),，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2-4×106細(xì)胞/ml，確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期,。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對(duì)細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。細(xì)胞的融合度必須要達(dá)到90%才能做啟動(dòng)子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動(dòng)子依賴于選用的細(xì)胞系和要表達(dá)的蛋白,。CMV啟動(dòng)子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得高表達(dá)活性。同其他啟動(dòng)子,，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細(xì)菌)相比,，在BHK-21中其活性較高。這三種細(xì)菌啟動(dòng)子在T細(xì)胞來源的細(xì)胞系,，如Jurkat中組成表達(dá)水平較低,。轉(zhuǎn)染后在培養(yǎng)基中加入PHA-L和PMA可以啟動(dòng)Jurkat細(xì)胞中CMV啟動(dòng)子，而單PMA就足以啟動(dòng)KG1和K562(人骨髓瘤白細(xì)胞)中的CMV啟動(dòng)子,。SV40啟動(dòng)子的表達(dá)在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)時(shí)會(huì)提高,，因?yàn)榇骉抗原可以刺激染色體外的合成。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。貴陽(yáng)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,，轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能,、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,，其應(yīng)用越來越***,。那么，羅氏都有哪些轉(zhuǎn)染試劑,，其優(yōu)勢(shì)都有哪些,？圖1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介：X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中,，經(jīng)0.2μm濾膜過濾,，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn),。廣州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家表達(dá)水平與位臵無關(guān),，不會(huì)受到周圍染色體元件的影響。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),，比如：HeLa，293,，CHO,，COS7，MCF－7,，HepG2等細(xì)胞,，是否加血清，對(duì)不同的細(xì)胞是有不同的影響的,，有些細(xì)胞是可以有血清的,，有些加血清就會(huì)受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入,。加入過早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，過晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡,?？蓪?shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異,。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同,，質(zhì)粒定量差異,，操作手法上的差異等,，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件,。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量,。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細(xì)菌載體，質(zhì)粒DNA,，RNA，PCR產(chǎn)物,，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果,。細(xì)菌載體對(duì)特定宿主細(xì)胞傳染效率較高，但不同細(xì)菌載體有其特定的宿主,，有的還要求特定的細(xì)胞周期,，如逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌需侵染分裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）,。除載體構(gòu)建外,，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響,。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用,，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調(diào)控,，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。能與核酸的磷酸根通過靜電作用,，將DNA分子包裹入內(nèi),。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常用方法：磷酸鈣共沉淀原理：該法可用于瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對(duì)pH,、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對(duì)許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性,，轉(zhuǎn)染效率較差,。實(shí)驗(yàn)步驟：將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合，同時(shí)控制好pH,、溫度等條件→室溫孵育,，生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細(xì)胞中，促進(jìn)DNA粘附在細(xì)胞表面→共沉淀通過內(nèi)吞作用進(jìn)入胞漿→分析細(xì)胞瞬時(shí)基因表達(dá)或者選擇穩(wěn)定性傳染,。操作簡(jiǎn)便,，對(duì)細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞,。蕪湖成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。貴陽(yáng)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如：HeLa,，293,，CHO，COS7,，MCF－7,，HepG2等細(xì)胞，是否加血清,，對(duì)不同的細(xì)胞是有不同的影響的,，有些細(xì)胞是可以有血清的，有些加血清就會(huì)受影響,。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng),，過晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡,。可實(shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清,。貴陽(yáng)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買