細(xì)胞轉(zhuǎn)染，你至少要掌握以下幾點(diǎn)：胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能,、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,，其應(yīng)用越來越普遍,?？煞譃樗矔r(shí)轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等,。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,，因此一個(gè)宿主細(xì)胞可存在多個(gè)拷貝數(shù),，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天,，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析,。一般來說,，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果,，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白,，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè),。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在,。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,。外源DNA整合到染色體中概率很小,，通常需要一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,。濟(jì)南正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場(chǎng)強(qiáng)度要合適合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要,，電場(chǎng)強(qiáng)度不能過高，過高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場(chǎng)強(qiáng)值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場(chǎng)強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA~寧波正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好瞬時(shí)表達(dá)分析檢測(cè)未重組質(zhì)粒DNA上基因的表達(dá),。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品,。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞,。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑,。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng),，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染,，你至少要掌握以下幾點(diǎn)：主要有下面幾種方法：：化學(xué)法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法,、陽離子脂質(zhì)體法,；物理法：電穿孔法,、顯微注射法、顆粒傳遞法,；細(xì)菌介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌,、腺細(xì)菌A.陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞,。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單通用，適用性廣,，轉(zhuǎn)染效率高,，重復(fù)性好,，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清，轉(zhuǎn)染效率隨細(xì)胞類型變化大,。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞,，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高,。懸浮細(xì)胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對(duì)細(xì)胞膜的干擾,，使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔細(xì)胞轉(zhuǎn)染是完成這一過程的必需步驟,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物,。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩,。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí),。6.到時(shí)后,，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí),。通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對(duì)于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要,。廈門細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法,。濟(jì)南正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,，但大多大同小異,。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意,，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異,，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件,。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量,。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細(xì)菌載體，質(zhì)粒DNA,，RNA,，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果,。細(xì)菌載體對(duì)特定宿主細(xì)胞傳染效率較高,，但不同細(xì)菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期,，如逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌需侵染分裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）,。除載體構(gòu)建外,，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,，如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用,，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,，因此選擇組成或可調(diào)控,，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾,。濟(jì)南正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買