鼠尾膠原實驗應用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞,，培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,，平均厚度約為1mm,；HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形,，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接,；同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑,。涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。昆明正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀；2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂,、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理,；(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預凍2?4小時,，然后真空冷凍干燥,，凍干產(chǎn)品經(jīng)進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌,、包裝,，得到成品膠原蛋白粉末。杭州鼠尾膠原哪家便宜制備鼠尾膠原（兩個同學一組操作）,。

鼠尾膠原實驗應用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞,，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯筒牧鲜侵魏霉侨睋p的中心環(huán)節(jié),。目前,，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2],，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是,，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要,。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學者孜孜以求的目標,。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上,，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長,。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。膠原蛋白按其應用可以分為食品級,、一般級,、醫(yī)藥級。

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達,。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性?？梢栽跓o菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗。溫州太原鼠尾膠原

期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液。昆明正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,，經(jīng)過乙酸抽提,、離心、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度,、高活性膠原蛋白，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,，可用于包被細胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經(jīng)節(jié)細胞,、胚胎細胞,、肌細胞,、肺細胞、神經(jīng)鞘細胞等,。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板,，規(guī)格為6/24孔板，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附,。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞，可以獲得良好的細胞貼壁率,，細胞增殖速度快,，形態(tài)均一，細胞培養(yǎng)成功率高,。昆明正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家