外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,,通過(guò)分析外泌體的組分,可以幫助識(shí)別其來(lái)源的細(xì)胞類型,。這一特性已被應(yīng)用于開(kāi)發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層。外泌體(Exosome)發(fā)現(xiàn)于1986年,,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體,。太原外泌體提取試劑廠家
專利申請(qǐng)利用分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行體外培養(yǎng),直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái),,無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,。人尿液來(lái)源細(xì)胞的外泌體的獲取方法,是首先分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,,將人尿液來(lái)源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過(guò)0.22微米濾膜過(guò)濾,,以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì);然后離心除去細(xì)胞器,,留取上清;再使用可截留100KD分子量的膜,,通過(guò)離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,,使用PBS對(duì)膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液。濟(jì)南外泌體提取試劑直銷廠家外泌體提?。好庖叻蛛x外泌體的原理大多是通過(guò)抗體包被的微球,,特異性結(jié)合外泌體。
1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),,無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,,因此,,可以采用密度梯度離心法來(lái)分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,,原理是先除去非囊泡物質(zhì),,再通過(guò)梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,,因此,,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時(shí)間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,,特別是這個(gè)密度范圍又比較寬,。外泌體提取:密度梯度離心,。
所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,,調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí),,外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)一些病癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送,。外泌體相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)有哪些,?lexoRBase數(shù)據(jù)庫(kù)收集和描述人類血液外泌體中所有長(zhǎng)的RNA,包括circRNA,、lncRNA和mRNA,。lEVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫(kù)匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白、mRNA,、miRNA,、脂類等信息。lExoCarta數(shù)據(jù)庫(kù)主要收錄了包括人,、大鼠,、小鼠、綿羊等幾個(gè)物種的286個(gè)研究結(jié)果,,涉及蛋白,、mRNA、miRNA,、脂類等信息,。外泌體的提取方法:磁珠免疫法。廣州正規(guī)外泌體提取試劑廠家
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中,。太原外泌體提取試劑廠家
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來(lái)說(shuō),,更是極為不請(qǐng)便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,,無(wú)論是過(guò)濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響太原外泌體提取試劑廠家