外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,，原理是先除去非囊泡物質(zhì)，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足,，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個密度范圍又比較寬,。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng),。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì),。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原呈遞,、細(xì)胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中,。目前的主流觀點(diǎn)認(rèn)為,，外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome）,，再形成多泡體（multivesicularbodies,，MVB），較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì),、脂類、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年,，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome,。對于外泌體的作用,，當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。杭州外泌體提取試劑廠家供應(yīng)現(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞,、一些病癥細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。

密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣,，用的較少。原理是：像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,，隨后通過離心將外泌體分離,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,，對離心時間極為敏感。具體步驟是：收集培養(yǎng)2d的上清液,。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細(xì)胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖,、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,，以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫,。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動脈硬化,。分子標(biāo)記。疾病診斷,。在酒精性肝病,、NASH、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志。外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法,。

1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中，包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細(xì)胞間通訊,，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,。合肥外泌體提取試劑平均價格

嚴(yán)重阻礙了我國在外泌體的研究和臨床應(yīng)用上的發(fā)展。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體（exosome）是所有細(xì)胞釋放出的菌類大小的顆粒,。它們天然地存在于血液中,。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項(xiàng)新的研究，對外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法,。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士,。在這項(xiàng)新的研究中,，經(jīng)過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,，增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運(yùn)送小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA）分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活,。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,，這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞（包括病細(xì)胞）中。外泌體在免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦