細胞轉染那些事兒：1.選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉染。對大多數(shù)細胞而言,，均需要在轉染當天或前現(xiàn)在鋪板,，第二天上午進行轉染,，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞,，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化,。2.對于貼壁細胞,，一般要求在轉染前一日,，用胰酶處理為單細胞懸液,，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液,。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率,，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉染前可用環(huán)丙沙星處理細胞以除去支原體,。4.細胞轉染時需要一定的細胞密度,，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定,。長沙細胞高效轉染試劑廠家

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉染整整半年,，百思不得其解,。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后,，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的,，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡,。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候,，較好不要換液,，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清金華正規(guī)細胞高效轉染試劑廠家推薦轉化,、轉染,、轉導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經(jīng)常碰到的,。

細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的70－90％）,。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,，當細胞貼壁完全后即可開始轉染,。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）,。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用,，在換液前細胞幾乎不生長,，所以需要密度比較大時做轉染,。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養(yǎng)皿用240μl反應總體積為例,。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質(zhì)粒DNA（總量1-3μg為佳）,，混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min,，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。

細胞轉染簡介：轉染,，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術,。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉染大致可分為物理介導,、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學介導方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導的技術；生物介導方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,，應該具有轉染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術,，是目前轉染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,，細菌轉染方法的準備程序復雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及,。其它物理和化學介導的轉染方法,，則各有其特點,。細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異。

瞬時轉染和轉染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內(nèi)就結束了,。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質(zhì)粒表達和監(jiān)測轉染步驟的效率,。可以使用報告基因來確定優(yōu)化條件,，其表達蛋白易檢測,，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉移酶（CAT）,，綠色熒光蛋白（GFP）,，熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達以測定轉染效率和活性,。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因，轉染入真核細胞內(nèi)后可以直接表達bgal,。結合簡單的檢測步驟,，可以做為監(jiān)測轉染條件的一種方便靈敏的方法細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。重慶細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨

果觀察到轉染效率降低,，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果,。長沙細胞高效轉染試劑廠家

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡,。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候,，較好不要換液，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清。過早的話,，會引起未轉染的細胞瘋狂生長,。長沙細胞高效轉染試劑廠家