RNA提取關(guān)鍵點(diǎn):RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無(wú)數(shù)人頭疼的問(wèn)題,,較佳方法是保證樣品完全裂解,,但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒(méi)轍了。為了提高裂解效果,,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K,、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國(guó)外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,,專門用于血液RNA的快速提取純化,。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方,可直接從新鮮,、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,,操作簡(jiǎn)便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取,。RNA提取得率較高,,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,,裂解液和洗脫液經(jīng)過(guò)多次優(yōu)化,,有效地去除了蛋白、色素,、脂類等雜質(zhì)污染,特別適用于血液包括細(xì)菌,、病菌等傳染的分子檢測(cè)。移去水相后,,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì),。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織,;Trizol法裂解能力較強(qiáng),,尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提?。涣硗釺rizol作為一種通用型的裂解試劑,,還可以用于植物組織,、細(xì)菌、菌類等組織的提取,。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶,、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取,。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低,;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染,;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染;(4)樣品降解等問(wèn)題,。合肥正規(guī)RNA提取試劑廠家若比值較低,,說(shuō)明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,,則提示RNA有降解,。
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性,。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,,但是由于種種原因無(wú)法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí),,使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時(shí)也可以有效解決組織,、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問(wèn)題,。此外,如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化,,減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性,。無(wú)論是人,、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,,該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果,。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品,所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成,。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,,故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交,、poly(A)+選擇,、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等,。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對(duì)照顯示,,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過(guò)了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量~細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):方便快捷的離心柱操作方式。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一,、原理簡(jiǎn)介,。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二,、試劑盒特點(diǎn):1,、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,,可重復(fù)性好,。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端,。2,、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3,、獨(dú)有的RL裂解液配方,,可以有效的消除基因組污染。4,、多次漂洗去蛋白過(guò)程,,提取RNA純度更高。5,、有效的去除了無(wú)用的5S在總RNA中含量,,提高了純度。RNA提取試劑注意事項(xiàng):耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶,。合肥正規(guī)RNA提取試劑廠家
RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無(wú)數(shù)人頭疼的問(wèn)題。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦
RNA提取醇沉淀不是越多就越好,。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次,。實(shí)際上,,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍,。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,,多整幾次,,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn),。一般情況下,,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可,。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,,那就只能放棄純度,,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來(lái)較高的得率,。圍繞DEPC的玄學(xué),。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase,。這一點(diǎn)是要肯定的,。不過(guò),在使用DEPC的過(guò)程中,,又充斥著一些玄學(xué),。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道,。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用,。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物,。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦