細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要，電場強度不能過高,，過高會增加細胞的死亡率,；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細胞系具有不同的較佳場強值,，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差,，電轉(zhuǎn)后,，細胞膜的恢復(fù)能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。無錫正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

轉(zhuǎn)染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應(yīng)用而異。一般轉(zhuǎn)染時,，貼壁細胞密度為70%-90%,，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉(zhuǎn)染時細胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉(zhuǎn)染效率對細胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細胞產(chǎn)量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了。這些結(jié)果說明,，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細胞密度而異金華北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物,。

細胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1.脂質(zhì)體法,。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi),。帶正電的陽離子脂質(zhì)體則不同,，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞,。脂質(zhì)體法始于1987年,，此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性較大提高,。陽離子脂質(zhì)體細胞毒性相對較高,，對不同的細胞可能會干擾細胞的代謝。2.非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,。較新的納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,，如Entranster試劑，納米材料,，細胞毒性小,，轉(zhuǎn)染效率高，漸漸成為各大實驗室的選擇轉(zhuǎn)染試劑,。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要,，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻說傳代不要超過17代,。細胞復(fù)蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細胞去做,，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性,。因此，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,。或者,，幾種來源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)在有售~來指示細胞中目標基因是否存在,，這樣的報告基因一般可以在轉(zhuǎn)染后一兩天內(nèi)檢測到,。

細胞轉(zhuǎn)染之PEI轉(zhuǎn)染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的70－90％）,。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前2h換液（用1.5ml無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）,。注：PEI轉(zhuǎn)染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長,，所以需要密度比較大時做轉(zhuǎn)染,。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養(yǎng)皿用240μl反應(yīng)總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質(zhì)粒DNA（總量1-3μg為佳）,，混勻后加入等體積PEI工作液,，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育,。對大多數(shù)細胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當天或前現(xiàn)在鋪板,，第二天上午進行轉(zhuǎn)染,。金華北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

瞬時轉(zhuǎn)染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中,。無錫正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗，比如：HeLa,，293,，CHO，COS7,，MCF－7,，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的,，有些細胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時加入,。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡,?？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。無錫正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹