糖原染色法:染色原理細(xì)胞胞漿中存在糖原或多糖類物質(zhì)(如糖蛋白,、粘多糖,、糖脂、粘蛋白等),過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化為二醛基,,其與Schiff試劑中的無色品紅結(jié)合后呈現(xiàn)紫紅色,沉積在細(xì)胞內(nèi)多糖所在之處,。染色步驟:1.組織石蠟包埋切片后脫蠟至水,,蒸餾水洗2min(細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加過碘酸溶液,,氧化5min,;3.蒸餾水洗10min;4.滴加Schiff試劑,,侵染10-20min,;5.傾去Schiff試劑,流水沖洗10min,;6.滴加蘇木素染色液,,染核1-2min;7.流水沖洗5min,;8.酸性乙醇分化液分化~無水酒精滲透較慢,,而且容易產(chǎn)生極化。正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜
注意事項:染色前:①切出的石蠟切片要好,,不能有皺褶或者刀痕,,切片不能太厚。②撈片時,,較好一張玻片撈一個組織,,組織較好位于玻片的中間,美觀的同時也利于脫蠟(有時二甲苯的液面低于組織片的時候,,達(dá)不到脫蠟的目的),。③石蠟切片脫蠟到水時,一定要注意組織切片脫蠟務(wù)必要徹底(脫蠟時間不能太少)以使脫蠟后的組織達(dá)到真正的“干凈”,。否則剩余的未脫干凈的石蠟粘附在組織表面,,在染色時染色液未能充分與組織接觸,較終導(dǎo)致染色效果不佳,甚至染不上顏色,。④在染色過程中較好不要在玻片上貼標(biāo)簽紙,,以避免脫蠟時把標(biāo)簽紙也浸沒,致使標(biāo)簽紙上的膠黏到玻片上,,造成染色不佳,。福建提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)糖原染色顯示在肝或心肌細(xì)胞內(nèi)有大量糖原存在即可確診.。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨,、垂體、霉菌,、色素,、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等,。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑,,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色,。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),,使用時應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,,這是很關(guān)鍵的步驟,。PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原,。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟,。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去,。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液,。
糖原染色試劑盒。含乙二醇基的多糖經(jīng)過碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,,與雪夫(Schiff)試劑中無色品紅結(jié)合,,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng),。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,,冷卻60℃時過濾,加1mmol/L鹽酸20ml,,再冷卻至25℃左右,,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,,置暗處24h,,無色即可放冰箱中保存,呈微紅色,,則加活性炭1~2g,,吸附過濾使成無色液體,放冰箱中保存,。若溶液變紅,,即不能再用。(2)10g/L過碘酸水溶液:過碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml,。溶解后蓋緊放冰箱備用,,一般可用3個月,變黃則失效可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細(xì)胞,。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:PAS染色時需于暗處加蓋反應(yīng),,染色時間10~20min(染色時間長短取決于試劑的質(zhì)量和環(huán)境溫度,SO濃度高,,染色時間適當(dāng)縮短,;環(huán)境溫度高,染色時間也應(yīng)適當(dāng)縮短,,反之則需適當(dāng)延長反應(yīng)時間),。染色過程中不能接觸伊紅,以免造成顏色誤差[4],。作糖原染色時,,較好作消化對照,即取兩張連續(xù)切片,,其中一張脫蠟至水后,,用1%淀粉酶于37℃消化30min,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,,不經(jīng)消化處理的切片染色陽性,,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,,不能保存,,因此,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,,用過一次即應(yīng)廢棄,。各種試劑必須是化學(xué)純或者分析純。器皿,、染色缸必須潔凈而干燥,。對某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍(lán)有異染性。山東口碑好的糖原染色試劑盒直銷價
細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究,。正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定。糖原易溶于水,,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗,。應(yīng)避免用水溶性固定液,,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,,能較好地保存糖原,,但有使糖原流動到細(xì)胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認(rèn)為是由于固定劑把細(xì)胞內(nèi)的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成,。其他組織應(yīng)用中性福爾馬林固定為佳,。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應(yīng)措施,。乙醇能沉淀白蛋白,、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,,但仍可溶于水,,因此較好不單獨使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳正規(guī)糖原染色試劑盒哪家便宜