細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門(mén)技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn),。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是,，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點(diǎn)對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異。溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時(shí),，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好,。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)滿或處于靜止期。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對(duì)細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說(shuō)明，對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異~廈門(mén)正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法,、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法,。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過(guò)直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞,。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實(shí)驗(yàn)條件控制較嚴(yán)、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜,、而且可能對(duì)于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對(duì)于很多普通細(xì)胞系，一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法~

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的方法有哪些：1..電穿孔法,。通過(guò)短暫的高電場(chǎng)電脈沖處理細(xì)胞,，沿細(xì)胞膜的電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過(guò)孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的,。電脈沖和場(chǎng)強(qiáng)的優(yōu)化對(duì)于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因?yàn)檫^(guò)高的場(chǎng)強(qiáng)和過(guò)長(zhǎng)的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞,。理論上說(shuō)電穿孔法可用于各種細(xì)胞，且不需要另外采購(gòu)特殊試劑,，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀,。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA，因?yàn)榧?xì)胞的死亡率高,。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中,，經(jīng)過(guò)包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌,，再進(jìn)行傳染。優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率特別高,，尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞,、細(xì)胞。缺點(diǎn)是構(gòu)建細(xì)菌周期長(zhǎng),，環(huán)節(jié)多,，易出錯(cuò),，費(fèi)用也高。到時(shí)后,，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品,。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞,。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。另外,，為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng),，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門(mén)技術(shù),。溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)

細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長(zhǎng)短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素。溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑一般會(huì)增加細(xì)胞的通透性,，這樣會(huì)把血清中的成分帶入細(xì)胞,，造成細(xì)胞毒性,。陽(yáng)離子脂質(zhì)體,，轉(zhuǎn)染的過(guò)程是帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì),，在轉(zhuǎn)染過(guò)程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)核酸的吸附,，影響轉(zhuǎn)染效率,。同時(shí),，也會(huì)將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性,，故不能有血清轉(zhuǎn)染,。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無(wú)血清培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實(shí)是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的降低,。溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)