詳細步驟如下:1.75%酒精浸泡大鼠尾巴30min,;2.將尾巴剪開、去掉皮毛,,并剪成小段(3cm左右),,抽出銀色的尾鍵;3.把剪碎的尾鍵置于150ml,,0.1%消過毒的醋酸中,,4℃放置,并不時振蕩,;4.48h后取上清,,4000轉離心30min后,取上清,;5.分裝上清(鼠尾膠)4度(或-20度)保存,。有時可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10-20ml醋酸,,重復以上步驟,,以制備更多的鼠尾膠。在使用時,,先將冰存的膠原液在室溫下解凍,,再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿:1)用吸管吸取膠原液,在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2)若包被的是培養(yǎng)瓶,,可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,,即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞,。若為培養(yǎng)皿或板的話,可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),,將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),,蓋緊飯盒蓋,四周用封口膠封死,。制備鼠尾膠原:將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡。金華鄭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌,、預冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結)立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試),。貴陽正規(guī)鼠尾膠原進貨價吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克),。
膠原蛋白的功效與作用:一提起膠原蛋白,,女性朋友們眼睛都放光了,因為我們都知道膠原蛋白被稱為我們皮膚的“軟黃金”,,層中70%都是膠原蛋白,,膠原蛋白含量的多少決定克皮膚的年輕程度!是讓我們皮膚變得有彈性的東西,。大部分只知道需要補充膠原蛋白,,但是卻不知道什么時候需要補充膠原蛋白,總認為自己還年輕不需要補充,,其實這是錯誤的觀念,,膠原蛋白在女性20歲的時候就已經(jīng)開始流失了,含量逐漸下降,,25歲后進入流失的高峰期,,40歲時的含量不到80歲的一半,所以我們應該20歲就開始補充膠原蛋白,,以保持皮膚的年輕狀態(tài),。
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2,。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,,倒入0.5mL自組裝液,室溫放置20min,。予自組裝液自組裝24h,。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中,。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察,。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL;滴加1mol/L的氯化氫,調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,,然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),,約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,成本低廉,。探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果,。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸,、等滲氯化鈉溶液、鈣液,、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司,。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀,。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,,去掉皮毛,,并剪成小段,抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中,,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,,將肌鍵置于平皿中剪碎,,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,,將肌鍵分散于醋酸溶液中,,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min,。在醋酸溶液的酸解下,,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存,。當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原,。金華正規(guī)鼠尾膠原單價
制備鼠尾膠原:離心,,4000轉/分,,10-15分鐘。金華鄭州鼠尾膠原
簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,,純度達到95%以上,,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,,特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng),;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長,。質(zhì)量標準:1,、SDS-PAGE分析純度大于95%。2,、無菌檢驗結果為陰性。3,、本品2μg/cm2包被細胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細胞,,貼壁及生長正常。4,、本品濃度1mg/mL,,pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠,NIH-3T3細胞在三維凝膠內(nèi)生長正常,、PC-12細胞在三維凝膠表面生長正常,。金華鄭州鼠尾膠原