細胞轉(zhuǎn)染,，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法,、DEAE-右旋糖苷法,、陽離子脂質(zhì)體法；物理法：電穿孔法,、顯微注射法,、顆粒傳遞法,；細菌介導法：逆轉(zhuǎn)錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞,。特點：簡單通用,，適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高,，重復性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清,，轉(zhuǎn)染效率隨細胞類型變化大,。由于脂質(zhì)體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高,。懸浮細胞建議使用電穿孔法,。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,，使其形成利于核酸進入的微孔因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大,，實驗必須很小心,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加,，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡,。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候,，較好不要換液，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清石家莊正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家其它物理和化學介導的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點,。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞,。這降低了細胞的活性，導致轉(zhuǎn)染效率低,。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~

細胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞,，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔,。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內(nèi)的。電脈沖和場強的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞,。理論上說電穿孔法可用于各種細胞,，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀,。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細胞和DNA,，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進行多次優(yōu)化,。2.細菌介導的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經(jīng)過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌,，再進行傳染,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候,，在開展正式實驗前要多做預試驗,，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量,、DNA密度,、細胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等,。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候,，如果電壓太大，往往會發(fā)生細胞大量死亡的情況,。不同的細胞,，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗,，多摸索條件,。對于大多數(shù)細胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm,。另外,，就是進行轉(zhuǎn)染的細胞應該處于對數(shù)生長期。處于對數(shù)生長期的細胞的抗損傷能力是較強的,。細胞濃度應該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應該控制在4-6μg，如果﹥10μg,，轉(zhuǎn)染效率也較大降低,。電擊后，應該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10分鐘,，使細胞恢復損傷,。細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價

加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價

細胞轉(zhuǎn)染之PEI轉(zhuǎn)染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞,，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的70－90％）,。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,，當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前2h換液（用1.5ml無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）,。注：PEI轉(zhuǎn)染法對細胞生長有克制作用,，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉(zhuǎn)染,。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養(yǎng)皿用240μl反應總體積為例,。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質(zhì)粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液,，充分混勻后室溫靜置20-30min,，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育,。徐州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價