法爾和梅洛的發(fā)現(xiàn),??茖W(xué)家在矮牽牛花實(shí)驗(yàn)中所觀察到的奇怪現(xiàn)象,,其實(shí)是因?yàn)樯矬w內(nèi)某種特定基因“沉默”了,。導(dǎo)致基因“沉默”的機(jī)制就是RNA干擾機(jī)制。此前,,RNA分子只是被當(dāng)作從DNA(脫氧核糖核酸)到蛋白質(zhì)的“中間人”,、將遺傳信息從“藍(lán)圖”傳到“工人”手中的“信使”。但法爾和梅洛的研究讓人們認(rèn)識(shí)到,,RNA作用不可小視,,它可以使特定基因開(kāi)啟、關(guān)閉,、更活躍或更不活躍,,從而影響生物的體型和發(fā)育等。諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審會(huì)在評(píng)價(jià)法爾和梅洛的研究成果時(shí)說(shuō):“他們的發(fā)現(xiàn)能解釋許多令人困惑,、相互矛盾的實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果,,并揭示了控制遺傳信息流動(dòng)的自然機(jī)制。這開(kāi)啟了一個(gè)新的研究領(lǐng)域,?!奔?xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取。徐州正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA,。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,,非固定細(xì)胞核酸,或作溶酶體的一種標(biāo)記,。觀察死亡細(xì)胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群體,。雖然測(cè)定DNA和RNA含量時(shí)較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,但該方法已被許多實(shí)驗(yàn)室普遍采用,。RNA是核糖核酸,,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,,因此,,常用乙醇來(lái)沉淀溶液中的DNA和RNA,。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來(lái)沉淀RNA,。RNA提取試劑廠家RNA提取試劑注意事項(xiàng):TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,,避免接觸皮膚或吸入。
昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測(cè):如果需要做Northern雜交,,強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,,因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲(chóng)的28SRNA被切割成兩個(gè)小的片段,,彼此用氫鍵相連,,所以在甲醛變性膠中,沒(méi)有28S帶出現(xiàn),。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收,。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),,進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量),。RNA純度測(cè)定:無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng),。
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),,操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用,。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料,、各種微生物,、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例,。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),,無(wú)需苯酚氯仿抽提等步驟,,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,,提取操作光需20分鐘便可完成,。可從全血,,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,,細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞中分離總RNA。
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織,;Trizol法裂解能力較強(qiáng),尤其適合小樣本及特別難提取的組織,,如兔子皮膚,,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提取,;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,,還可以用于植物組織、細(xì)菌,、菌類等組織的提取,。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉,、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取,。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染,;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染,;(4)樣品降解等問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)者只需要按照說(shuō)明書(shū)上的步驟操作即可,。使用時(shí)無(wú)需配制其它試劑,,非常方便,適合于RNA的快速提取,。徐州正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)
tRNA是mRNA上遺傳密碼的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者,。徐州正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)
RNA提取:預(yù)備工作RNA酶(Rnase)是導(dǎo)致RNA降解較主要的物質(zhì),。此酶非常穩(wěn)定,,在一些極端的條件下只可暫時(shí)失活,但限制因素去除后又迅速恢復(fù)活性,。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活,。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時(shí)必須戴手套,。2.RNase的又一污染源是取液器,。根據(jù)取液器制造商的要求對(duì)取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,,可基本達(dá)到要求,。3.塑料制品、玻璃和金屬物品的處理,。徐州正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)