細胞凍存經(jīng)驗談:選對凍存培養(yǎng)基才是王道：研究人員經(jīng)常需要冷凍細胞并保存，以供后續(xù)實驗或臨床使用,?；具^程相當(dāng)簡單：慢慢冷凍細胞,，將凍存管放入液氮中,，并在需要時快速解凍。凍存培養(yǎng)基能支持細胞并防止冰晶形成,。不過,，Malfavon的體驗告訴我們，使用不同的凍存培養(yǎng)基,，結(jié)果那可是大不同。一些經(jīng)驗老道的研究人員自己制備凍存培養(yǎng)基,。不過,，那些面對脆弱細胞（比如原代和多能細胞）的研究人員，則更喜歡購買標準化的商業(yè)產(chǎn)品,。一些非常敏感的細胞系也許能從添加物中受益,，以避免細胞在解凍時凋亡。無血清快速細胞凍存液,，是一種新型的快速凍存細胞的保護液,，可將細胞置于-80^C直接冷凍保存。深圳無血清細胞凍存液進貨價

無血清細胞凍存液凍存細胞實驗步驟：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復(fù)蘇細胞存活率,。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中,。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）,。3.取相當(dāng)于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量,，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm,，4℃,，3~5min）。移去離心管中的上清液,。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,，制成細胞混合液,。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,，長期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐,。杭州無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液使用方法：直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱,，長期冷凍保存,。

無血清快速細胞凍存液凍存細胞復(fù)蘇方法：1、從冰箱里取出細胞冷凍保存管,，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。2、待凍存管中細胞混合液完全融化后,，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻,。3,、離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃,，3~5min）,，移去上清液。4,、清洗細胞,，充分洗凈殘留凍存液。5,、加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基,，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中,。6、鏡檢后,，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng),。

永生化的細胞系往往相當(dāng)健壯，因此,，使用實驗室自制的凍存培養(yǎng)基,，效果也不錯。典型的配方是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清,，或只是在血清中加入10%的DMSO,。DMSO的作用是取代細胞中的一些水，以防止冰晶形成,，刺穿細胞,。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學(xué)家RhondaNewman介紹，DMSO還能防止細胞在冷凍期間發(fā)生收縮,，而后在解凍時又變得腫脹,。血清，這種富含營養(yǎng)成分的物質(zhì)，直接支持細胞,?！爱?dāng)細胞處于這種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時，它們能夠更好地復(fù)蘇,。無血清凍存液使用方法：加入適量的細胞凍存液,，重懸細胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL,。

細胞冷凍的原理：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈,、交換和運送某些細胞,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分,。深圳無血清細胞凍存液進貨價

細胞保藏中心,，用于細胞株的長期保存。深圳無血清細胞凍存液進貨價

無血清細胞凍存液細胞凍存步驟：1.常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁細胞或懸浮細胞于試管中。2.確認所需凍存的細胞數(shù)量,。3.將所需凍存細胞收集于離心管中,，1000rpm，5min離心,，收集細胞沉淀,，并棄掉上清液。4.加入適量的凍存液于離心管中,，加入量按照細胞保存濃度為5X105至1X107/ml密度,，輕柔的混勻細胞，獲取細胞混合液,。5.將獲取的細胞混合液按照1~1.5ml/管,，分裝于凍存管中。6.將凍存管直接放入-80℃保存,，可長期保存,。無血清細胞凍存液，通用于各種動物細胞系及tumour細胞系,。特別的配方能有效提高細胞存活率和復(fù)蘇能力,。不含血清，無病毒,、霉菌和支原體等微生物污染,，確保凍存細胞安全。非常適用于無血清細胞培養(yǎng)和蛋白表達細胞的凍存,。深圳無血清細胞凍存液進貨價