實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。方法制作鼠尾膠原,，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無鼠尾膠原時(shí),，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接,；有鼠尾膠原時(shí),，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間(約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,。正規(guī)鼠尾膠原單價(jià)

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min,；2.將尾巴剪開、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右）,，抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml,，0.1％消過毒的醋酸中,，4℃放置,，并不時(shí)振蕩；4.48h后取上清,，4000轉(zhuǎn)離心30min后,，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存,。有時(shí)可繼續(xù)向4,。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復(fù)以上步驟,，以制備更多的鼠尾膠,。在使用時(shí)，先將冰存的膠原液在室溫下解凍,，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液,，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長(zhǎng)面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養(yǎng)瓶,，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶?jī)?nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞,。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi)，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死。正規(guī)鼠尾膠原單價(jià)鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。

鼠尾膠原：1實(shí)驗(yàn)制備：實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）,。2、切割小玻片,。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。實(shí)驗(yàn)步驟：制備鼠尾膠原：1,、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱,；3,、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,；4,、重復(fù)步驟2、3,，直至尾腱量夠用,；5、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,。

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸,、等滲氯化鈉溶液、鈣液,、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司,。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀,。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,，去掉皮毛,，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡,。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎,，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液,。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中,，4℃放置一周,，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,，肌腱水解成膠凍狀凝膠,，置于冰箱4℃保存。制備鼠尾膠原：搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液（均需要無菌,、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用),，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,。無錫鼠尾膠原供應(yīng)商

當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片，制備細(xì)胞爬片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原,。正規(guī)鼠尾膠原單價(jià)

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國(guó)外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。正規(guī)鼠尾膠原單價(jià)