由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),穩(wěn)定性高,不易降解,,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷,、用藥監(jiān)控、預(yù)后判斷,。近年來(lái),,隨著人們對(duì)外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深,外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷,、治病和監(jiān)測(cè),;如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液,、血液,、唾液、腹水,、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA,、以及miRNA),在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。外泌體在免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。南京外泌體提取試劑直銷價(jià)
外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是其中對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,,其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),,let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹外泌體的提取分離:超濾離心,。
可以,。為了能夠高效提取細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體,,磁珠可重復(fù)使用5次(同一樣品)。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量,。1mL體積以上細(xì)胞上清樣本建議進(jìn)行濃縮后再回收,,提取時(shí)可進(jìn)行反復(fù)抽提,提高提取效率,。用血液樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),,需要根據(jù)磁珠狀況來(lái)判斷是否能重復(fù)利用;若磁珠發(fā)生聚集,,利用渦旋儀也無(wú)法使磁珠分散,,不建議繼續(xù)使用。詳情參考操作說(shuō)明書,。太好了,,這樣實(shí)驗(yàn)成本瞬間就降下來(lái)了,那樣品純化所需的比較低量是,?老師:使用旋轉(zhuǎn)器的需要500μL以上,,使用離心管混合器的需要100μL。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠,。同學(xué):電鏡分析需要外泌體的量是多少,?
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來(lái)說(shuō),,更是極為不請(qǐng)便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,,無(wú)論是過(guò)濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響外泌體提取:磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。
外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,,可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染,,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系,。外泌體可通過(guò)流式,、WB(檢測(cè)指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測(cè),,普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等,。但到目前為止,,仍沒(méi)有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性,。嚴(yán)重阻礙了我國(guó)在外泌體的研究和臨床應(yīng)用上的發(fā)展,。北京正規(guī)外泌體提取試劑平均價(jià)格
在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法,。南京外泌體提取試劑直銷價(jià)
外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,,內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA、蛋白質(zhì),、microRNA,、DN**段等多種物質(zhì),存在于血液,、唾液,、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,,雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,所以才被排出來(lái),,但是近年來(lái)研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞,。如今,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。專利申請(qǐng)利用分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行體外培養(yǎng),。南京外泌體提取試劑直銷價(jià)