外泌體（exosome）是所有細胞釋放出的菌類大小的顆粒,。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,，對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法,。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中,，經(jīng)過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,，從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解，增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運送小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA）分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,，這是因為這些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內(nèi)遷移和進入靶細胞（包括病細胞）中,。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾，進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì),。金華外泌體提取試劑平均價格

外泌體的提取,、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù),。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,，結(jié)果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者,。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程,，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì),。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比,，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體,。但是，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂,。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷外泌體提?。嚎梢詫⒉煌南疵撊芤簯?yīng)用于該方法。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）,。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑,；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,，對離心時間極為敏感。

聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細菌,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠,、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離。

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達,，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程,。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合,，從而阻滯整個生物通路。因此,，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達，與75例健康者相比,，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）,。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估，結(jié)果顯示,，12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達,。Cazzoli等收集了30個血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a,、-379a,、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908,。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值,。深圳外泌體提取試劑價格

外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。金華外泌體提取試劑平均價格

外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢：純化和富集的完整血漿/血清,，尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究；樣本輸入量多樣,；無需耗時的超速離心,，過濾或特殊注射器,；無需沉淀試劑，也無需過夜培養(yǎng),；無需蛋白酶處理,；適用于多種物種；外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白,；可以使用NanoSight®或電子顯微鏡分析純化的外泌體,，以評估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體（exosomes）是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。它普遍存在并分布于各種體液中,，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),，影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)金華外泌體提取試劑平均價格