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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-21

植物RNA提取:植物組織中,,富含酚類化合物,,或富含多糖,或含有某些尚無(wú)法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,,或RNase的活性較高,。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除,。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),,要選取針對(duì)植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化,、多糖化合物與核酸分離等難題,。1、植物的果皮,、果肉,、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,,研磨過(guò)程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,,避免RNA降解,。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低,。3,、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí),、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg),。4、植物組織,,如植物葉片,、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟,。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用,。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA,。成都正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦

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拭子RNA提取試劑的選擇,?1、產(chǎn)品價(jià)格,。價(jià)格也是選購(gòu)產(chǎn)品的重要考量因素,。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交、RT-PCR,、RealTimeRT-PCR,、cDNA文庫(kù)構(gòu)建等,國(guó)產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求,。與國(guó)外有名品牌相比,,國(guó)產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,價(jià)格還不到國(guó)外品牌價(jià)格的30%,,性價(jià)比較高。因而,,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國(guó)產(chǎn)試劑盒,。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,特別適合選用國(guó)產(chǎn)試劑盒,。2,、與國(guó)外有名品牌相比,國(guó)產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),,特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn)。在提取得率上,,國(guó)內(nèi)試劑盒與國(guó)外品牌差別不大,,而在價(jià)格方面,國(guó)產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì),。如果經(jīng)費(fèi)充足,,RNA純度要求特別高,可考慮選擇Q等國(guó)外有名品牌,。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),,可考慮選擇性價(jià)比較高的國(guó)產(chǎn)品牌。廣州正規(guī)RNA提取試劑廠家植物RNA提取試劑:提取的總RNA純度極高,,沒(méi)有蛋白和其他雜質(zhì)的污染,。

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RNA提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌RNA在提取后也仍然具有傳染性,在提取時(shí),,實(shí)驗(yàn)人員需要佩戴口罩和手套等各種防護(hù)裝備,,以防實(shí)驗(yàn)室污染。而有種「自動(dòng)滅活」的方法,,在更加便利的同時(shí),,也能更好的保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的安全,。許多樣品中含有高水平的RNase,這種酶也會(huì)加速RNA的降解,。為了使這種酶對(duì)降解的影響較小化,,較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的RNA。這種情況下,,可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解,。比如可以通過(guò)TRIzol?、RNA裂解緩沖液等使RNase失活,,然后再處理樣本,。另外,再采集樣本之后馬上加入DNA/RNAShield,,可以快速降解掉RNase等蛋白物質(zhì),。當(dāng)然,DNA/RNAShield也會(huì)保證取樣時(shí)微生物基因多樣性不會(huì)發(fā)生改變,。

昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液,。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液,。加0.7mL通用洗柱液,,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液,。加0.3mL通用洗柱液,,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液,。此步可以省略,。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用,。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,,室溫放置1~2分鐘,。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,,可以立即使用或存放于-80℃待用~RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測(cè)。

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拭子RNA提取試劑的選擇,?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,,如果要提高核酸得率,也可通過(guò)增加樣本量來(lái)實(shí)現(xiàn),。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣,。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q,、Biog等,。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來(lái)回刮擦10次)在0.5-3.5ug,。同樣處理的口咽拭子,,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求,??俁NA提取試劑:自備新開(kāi)封或?qū)iT氯仿,異丙醇,,75%乙醇,DEPC處理水,。廣州正規(guī)RNA提取試劑廠家

tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者,。成都正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦

RNA提取:主要試劑Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),,能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶,。1.Trizol試劑含有苯酚,,具有毒性和刺激性,注重操作,。2.RNase污染的主要來(lái)源是操作過(guò)程中手和空氣中的浮沉,,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴(yán),。3.細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速,。裂解不完全會(huì)降低較后得率,因?yàn)橐徊糠諶NA會(huì)殘留在未裂解的細(xì)胞中,。細(xì)胞裂解之后要看不見(jiàn)顆粒狀物質(zhì)(結(jié)締組織和骨除外),。在清洗和裂解細(xì)胞時(shí)較好在低溫下操作,防止在操作過(guò)程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。4.酵母和一些細(xì)菌由于細(xì)胞壁的特別結(jié)構(gòu),,可以加入Trizol試劑同時(shí)加入無(wú)RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,,使細(xì)胞裂解充分。2-8℃避光保存一年,。成都正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦