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糞便總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸,、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。試劑盒特點:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好,??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強,,適用于各種不同的土壤,、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟??焖?,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成,。多次柱漂洗確保高純度,,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9以上,可直接用于PCR,,Northern-blot和各種酶切反應(yīng),。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。太原RNA提取試劑廠家供應(yīng)
RNA提?。侯A(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品,。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,,通常不必再處理,。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O),。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強的劇毒物,,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,,置潔凈處備用,。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時以上。廈門廣州RNA提取試劑植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點:RNA純度更高,,無雜質(zhì)殘留,,特別適合于對純度要求很高的下游實驗,。
動物組織總RNA提?。?、盡量選取新鮮的組織,,如果不是新鮮的(較好在三個月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的,。在剪取組織時,,不要拿到室溫直接剪取,,一定要放到冰盒上,盡量避免反復(fù)凍融,。2、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織,,剪取樣本時盡量剪組織中心的部位,,或者先將大塊的組織先從中間切開,然后再在新鮮切口的位置剪取樣本,。取下的組織要充分的剪碎,,將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中,加入裂解液,,剪碎的組織要充分接觸裂解液,,準(zhǔn)備勻漿。3,、正常組織選取綠豆粒大?。?0~60mg)的組織進(jìn)行勻漿,如果組織中含有大量的蛋白,、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等,,適當(dāng)增減剪取組織的量(可選10~20mg)。4,、如果提取的是魚肌肉,,蝦肉,海蜇等含水分較多的組織時則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量(推薦100~200mg),。5,、條件允許的情況下,動物組織使用高通道組織勻漿機勻漿后即可直接進(jìn)行提取步驟,,如沒有該設(shè)備,。6、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上,,以減少RNA的降解,。
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點:1.有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA,。2.方便快捷的離心柱操作方式,。3.提取的RNA,品質(zhì)高,,產(chǎn)量多,。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含RNA),。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,,包括RT-PCR,qRT-PCR,,RNA-Seq,,陣列等,。6.細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR,。7.試劑盒可用于哺乳動物細(xì)胞或者組織樣品的提取,。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,,而不是總RNA,。例如,在一些表達(dá)譜研究中,,較好能夠提取成熟的細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA,。或者,,在研究分析未剪接的RNA前體時,,提取細(xì)胞核(Nuclear)RNA會是一個更好的選擇。然而,,市面上絕大多數(shù)廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的RNA,,不光費用高昂,而且浪費大量的材料與時間,。該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,,簡單,經(jīng)濟有效的方法,。這種情況下,,可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解。
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1,、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,,或者是在提取過程中導(dǎo)致的降級;應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取,,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,,并減少反復(fù)凍融。在RNA提取過程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭,、離心管及其他材料,,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時放于-80凍存,。如提取后的RNA需要進(jìn)行凝膠電泳檢測,,則應(yīng)提取好后立刻進(jìn)行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的,。2,、鹽及有機溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,,洗液沒有充分晾干導(dǎo)致的,殘留的鹽及有機溶劑對后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,,因此在提取過程中應(yīng)充分去除組織裂解液,,洗滌時應(yīng)充分,使管壁四周均能被洗滌到,,另外管子空離和吹風(fēng)是必須的步驟,,會進(jìn)一步降低有機物殘留。RNA提取試劑:TRIpure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個樣品,,所有的操作可以在一小時內(nèi)完成,。北京正規(guī)RNA提取試劑進(jìn)貨價
RNA提取試劑注意事項:所有離心管,泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染,。太原RNA提取試劑廠家供應(yīng)
眾所周知,,RNA提取是一項困難的工作。常見的挑戰(zhàn)包括RNA降解,、低產(chǎn)率和/或純度以及DNA污染,。此外,不同的樣品類型有自己獨特的特性,,需要特別注意,。例如,微生物(如革蘭氏陽性/陰性細(xì)菌,、菌類,、古生菌等)的細(xì)胞壁堅硬,不易被化學(xué)和酶解,。其他樣本類型,,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類、腐殖酸/黃腐酸,、單寧酸等),,可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,,如RT-qPCR,。RNA是不穩(wěn)定的,極易降解,。許多樣品含有高水平的RNase,,會快速降解RNA。為了使之較小化,,較好在采集時穩(wěn)定樣本中的RNA,。常用的樣品穩(wěn)定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室,。然而,,這些方法也有缺點,,如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時都能立即使用這些方法,。太原RNA提取試劑廠家供應(yīng)