外泌體,,是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結構,,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成。濟南正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體的提取分離:1,、超速離心法(差速離心),。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心,、高速離心交替進行(如圖所示),,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),,純度也受到質(zhì)疑,;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量,。2、密度梯度離心,。在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時。重慶外泌體提取試劑供應商外泌體提?。焊鶕?jù)外泌體的大小,,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心),。超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心、高速離心交替進行,,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),,純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時,對離心時間極為敏感
外泌體的提取方法學規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,費事費力,,而且步驟多導致實驗中容易污染,,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細胞上清來說,,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點,總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實驗也有影響,。獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,耗時,。
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應用潛能):外泌體生成機制表明,,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細胞類型,。這一特性已被應用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關疾病中進行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:適用于多種物種。武漢外泌體提取試劑平均價格
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法,。濟南正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答,、抗原提呈,、細胞遷移、細胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,,促進了一些病癥的生長與侵襲,。功能:當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,,如今隨著大量對其生物來源,、其物質(zhì)構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能,。濟南正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家