無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優(yōu)勢:傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,,血清的含量是10%,,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),,較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,,以防止冰晶過大,,造成細胞大量的死亡。)從冰箱里取出細胞冷凍保存管,,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。無錫太原無血清細胞凍存液
無血清凍存液使用方法:1、收集懸浮細胞或貼壁細胞,,離心去除上清培養(yǎng)液,。2、加入適量的細胞凍存液,,重懸細胞,,調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL。3,、將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中,。4、將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存,。5,、儲存條件:2-8C保存,年有效:-20C保存,,兩年有效,。無血清凍存液注意事項:1、請選擇對數(shù)生長期細胞進行凍存,。2,、凍存液加入細胞后,請盡快放入-80C冰箱凍存,。3,、本產(chǎn)品凍存細胞可以在-80°C冰箱保存3年以上,。4、若需長期凍存細胞,,請轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存,。5、凍存液中含DMSO成分,,為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套。蕪湖正規(guī)無血清細胞凍存液開蓋之前,,用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身,。
無血清細胞凍存液:細胞凍存及復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)中的重要技術(shù),細胞凍存是細胞長期保存的重要手段,。細胞凍存液,,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液,,供給細胞生命代謝所必須的營養(yǎng)物質(zhì),,同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。在現(xiàn)有技術(shù)中,,一般使用培養(yǎng)基,、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細胞,DMSO用量為10%,,過低的DMSO濃度會導(dǎo)致凍存效果欠佳,,但高濃度的DMSO有較大毒性,會對細胞體造成傷害,;且傳統(tǒng)凍存液配方中所使用的血清成本高,,增加動物病原污染的可能性。此外,,有研究表明長期與胎牛血清接觸的細胞會對溶液介質(zhì)中的胎牛血清發(fā)生內(nèi)吞,,內(nèi)吞胎牛血清后的間充質(zhì)干細胞有可能發(fā)生某些蛋白表達的變化,應(yīng)用于人體后可發(fā)生異種動物蛋白引起的免疫反應(yīng),,不能直接用于臨床輸注,。因此,利用含有血清的凍存液凍存的細胞會給臨床使用帶來一定的風(fēng)險,。
無血清細胞凍存液的用途:用途:1.無血清細胞凍存液用于造血干細胞,、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞,、NK細胞等免疫細胞的存儲,。3.無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:1.不含牛血清,,無動物源組分,。傳統(tǒng)的凍存液,,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成,。胎牛血清取自牛,,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動物源的應(yīng)用領(lǐng)域,。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,,無動物源組分。2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,,無需冷凍,,即取即用。為了避免反復(fù)凍融,,傳統(tǒng)的細胞凍存液,,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無血清細胞凍存液,,2-8℃保存即可,無需再進行分裝,。適量地稀釋后,,將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。
無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比:傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液,。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,,然后移至-20℃冰箱30分鐘,,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存,??梢姡寮毎麅龃嬉簝龃婕毎麜r遇到的問題:1.凍存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,,此步可省略),。2.需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),步驟繁瑣,,耗時耗力,。3.含血清,細胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險更高,。4.血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存,,且不能原位(如孔板)凍存,。無血清細胞凍存液不含牛血清,無動物源組份,。北京無血清細胞凍存液
快速凍存即不需要經(jīng)過梯度降溫,,直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h。無錫太原無血清細胞凍存液
細胞凍存:取出凍存管,,注明細胞名稱,,代數(shù),日期,。離心后,,以無菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細胞沉淀,。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,,根據(jù)計數(shù)結(jié)果,將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜,。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后,,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,,使溫度每分鐘大約降低1℃?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜,。若無凍存盒及其他凍存裝置,,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲存無錫太原無血清細胞凍存液