外泌體鑒定:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱(chēng)TEM,,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱(chēng)NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測(cè)速度快,,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins),;使用PBS對(duì)膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白。類(lèi)似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,,通過(guò)分析外泌體的組分,,可以幫助識(shí)別其來(lái)源的細(xì)胞類(lèi)型,。這一特性已被應(yīng)用于開(kāi)發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層合肥外泌體提取試劑供應(yīng)商外泌體提?。焊咚匐x心沉淀外泌體,。
這一特性已被應(yīng)用于開(kāi)發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,,外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白,。類(lèi)似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,通過(guò)分析外泌體的組分,,可以幫助識(shí)別其來(lái)源的細(xì)胞類(lèi)型,。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液,、尿液、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA,、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病也可以作為治病手段,,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病,。
用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):1、選擇血清還是血漿,?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過(guò)程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,,選擇血漿可避免不必要的影響,。2、注意抗凝劑的選擇,。肝素類(lèi)抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),,這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用。除了克制PCR,,肝素可以與外泌體結(jié)合,,阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類(lèi)藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達(dá)莫(CTAD),,CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),,但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA,、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái),無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,。武漢外泌體提取試劑平均價(jià)格
由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì)。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理,,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液(腦脊液、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過(guò)濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項(xiàng):1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過(guò)大時(shí),可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清,、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí),,可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。3.針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進(jìn)行Westernblot檢測(cè),,可以鑒定所提的外泌體。通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量,。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)