外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）,。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑,；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量,。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣，耗時,，對離心時間極為敏感外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

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為了分離外泌體，研究人員用兩個這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個裝置,。首先,，使用聲波從血液樣品中除去細胞和血小板。一旦細胞和血小板被去除,，樣品進入第二個微流體單元,，然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細胞外囊泡分開。這項工作的通訊作者之一,，麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說：“聲波更溫和,。而且在分離時，這些囊泡受處理的時間只有1秒鐘或更短,。這是一個很大的優(yōu)勢,。”使用該設(shè)備,，處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘,。“這種新技術(shù)可以解決當前外泌體分離技術(shù)的缺點,，如周期長,，一致性差,，產(chǎn)量低，污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過程簡化為按一個按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡單,。”研究人員們說,。

外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜（Size-exclusionchromatography,，SEC）是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子,。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根據(jù)其直徑通過微球,，半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。此外,，可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比,，色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu),。目前,，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,，該方法耗時較長,，不適合大量樣本處理用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷（應(yīng)用潛能）：外泌體生成機制表明,，通過分析外泌體的組分,，可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,，也在肝腎肺相關(guān)疾病中進行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,，使外泌體懸浮于液體上層外泌體提?。和ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,，這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

用于外泌體提取的體液收集注意事項：選擇血清還是血漿,？推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體來源及內(nèi)含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體,，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液,、眼淚,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA,、lncRNA,、circRNA、mRNA,、tRNA等）,、蛋白、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81,、CD9,、TSG101、HSP27等,。外泌體鑒定,。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight,、WesternBlot,、流式細胞術(shù)。珠海正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家