細胞凍存液是如何保護細胞的：細胞這一微小的生命體和地球的其它生命相似,，機體的主要成份是由液態(tài)的H2O組成，但是其結構微小復雜,，內(nèi)部任何的物理損傷對于它都是致命的,。水在低于零度的條件下會結冰。如果將細胞懸浮在純水中,，隨著溫度的降低,，細胞內(nèi)外的水份都會結冰，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞而引起細胞死亡,，這種因細胞內(nèi)部結冰而導致的細胞損傷稱為細胞內(nèi)冰晶的損傷,。如果將細胞懸浮在溶液中，隨著溫度的降低,，細胞外部的水分會首先結冰,，從而使得未結冰的溶液中電解質(zhì)濃度升高。如果將細胞暴露在這樣高溶質(zhì)的溶液中且時間過長,，細胞膜上脂質(zhì)分子會受到損壞,，細胞便發(fā)生滲漏，在復溫時,，大量水分會因此進入細胞內(nèi),，造成細胞死亡,。這種因保存溶液中溶質(zhì)濃度升高而導致的細胞損傷稱為溶質(zhì)損傷或稱溶液損傷,。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：2-8℃即可穩(wěn)定保存，無需冷凍,，即取即用。蘇州無血清細胞凍存液廠家現(xiàn)貨

無血清細胞凍存液：采用patent的凍存配方,，用包括重組人血白蛋白等多種蛋白組分替代了血清的用途,。用包括DMSO在內(nèi)的復合凍存保護劑替代了單一的DMSO的保護作用。復合保護劑的內(nèi)部保護劑,，易于穿透細胞膜，避免在細胞凍存過程中細胞內(nèi)部的水分子形成冰晶損傷細胞,；外部保護劑,，可在溶液形成冰晶之前,，在細胞膜外部競爭性的結合細胞膜表面的水分子,，從而降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽離子進入細胞的數(shù)量,。在細胞內(nèi)部與外部的協(xié)同保護作用下,，明顯降低了溫度迅速下降與溫度上升對細胞的損害，因此大幅度提高了細胞經(jīng)過凍存后的復蘇存活率,。正規(guī)無血清細胞凍存液哪家好無血清細胞凍存液可用于造血干細胞,、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。

細胞凍存和復蘇操作步驟：細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,，慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結晶快速融化,，避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi),，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。復蘇細胞應采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷,。

無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項：1.將分裝好的細胞凍存管,，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可備注：1,、凍存過程中,，第2步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷,。2、細胞凍存管一定要保證完全密封,，否則在復蘇過程中有可能會炸（1）提前開啟水浴鍋,，溫度調(diào)節(jié)到37（2）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中融化,，盡量1min融化,，時間越短，對細胞影響越小,。（3）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻，（如細胞冷凍保存液為500ul,，則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中,，如細胞冷凍保存液位1ml,，則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。）（4）混勻后立即離心,，800轉,，3min即可離心結束后棄上清，加入預溫的新鮮培養(yǎng)液,。（5）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。（二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定，通常為5%【注意事項】細胞系凍存密度備注正常人成纖維細胞1～310cells/ml雜交瘤細胞1～310cells/ml某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去,。反復吹吸混勻后,，分裝于細胞凍存管中，每管500ul-1000ul,。

含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題：1.凍存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮）,，步驟繁瑣,，耗時耗力。3.含血清,，細胞污染(細菌,、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次,、品質(zhì)間差異導致凍存液的批次間差異,。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存,。Cellregen無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分,，含DMSO、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液,。Cellregen無血清細胞凍存液的凍存方法是：將細胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長期保存。凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱,，穩(wěn)定保存數(shù)年,。石家莊正規(guī)無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液產(chǎn)品特色：各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。蘇州無血清細胞凍存液廠家現(xiàn)貨

細胞凍存時間和操作步驟：1,、首先我們需要凍存培養(yǎng)液,，通常細胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油,、10-20%的小牛血清,；、取對數(shù)生長期細胞,，并且還需要用PBS進行清洗,，需要注意在這里要丟棄掉舊的細胞凍存液,；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶,，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜,，然后把單層生長的細胞消化掉；然后離心1000rpm5min時間,；4,、去除胰蛋白酶，加入凍存培養(yǎng)液,，輕輕吹打使細胞的分布變得均勻,，調(diào)節(jié)細胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細胞密度,；5,、將細胞裝入凍存管之中，每管的含量應該保持在1～1.5ml之間,。在凍存管上標明細名稱,、時間、操作者,；6,、較后要說的就是細胞凍存的時間了，對于標準的凍存程序來說,，需要進行梯度降溫,，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達到-25℃以下時,，那么就可增至-5℃～-10℃/min,；等到-100℃的時候，可迅速的放入到液氮之中,。蘇州無血清細胞凍存液廠家現(xiàn)貨