研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性,。與脂質(zhì)體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,,外泌體含有可能增強內(nèi)吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,,從而促進其內(nèi)容物的遞送,。CD47是外泌體蛋白質(zhì)之一,是一個普遍表達的整合素相關(guān)跨膜蛋白,,其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用,。CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,,增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體,。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性,。研究人員發(fā)現(xiàn),,CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性,。所以,,外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期,。用于外泌體提取的體液收集注意事項:注意抗凝劑的選擇,。南昌外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體(Exosome)是細胞主動分泌的囊泡樣小體,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,,幾乎所有細胞都可分泌,在血液,,尿液,,唾液,腦脊液,,腹水,,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中,。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細胞如何組織其內(nèi)部較重要的運輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。徐州外泌體提取試劑直銷廠家目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。
由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,,另一方面也可以作為治病手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病,。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,,獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,,目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),,在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移,、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。
外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來,,高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,,這為我們揭示了更多具有生物標志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達情況,,發(fā)現(xiàn)CD151,、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達不光能區(qū)分一些病癥與正常組織,同時也能區(qū)分各種肺病的組織亞型,。此外,,聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細胞系和兩個攜帶NSCLC細胞系的外泌體的蛋白表達譜,,從中篩選出如細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子,、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性,。由于國內(nèi)有關(guān)外泌體提取試劑的缺乏,,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進口提取試劑盒,。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。
人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,,包括內(nèi)皮細胞,、免疫細胞、血小板,、平滑肌細胞等,。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,,進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路,。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,,從而細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑單價
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外泌體的提取方法:1、色譜法,。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,,首先被流動相洗脫出來,;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,,更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍,。2、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細胞外泌體的一種新方法,。南昌外泌體提取試劑廠家直銷