外泌體因諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)而被眾人知曉，也因其作為生命信息傳遞者,，在體液中普遍存在及易獲得性等特點(diǎn)被譽(yù)為液體活檢"新貴",，成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點(diǎn)，尤其是在一些病癥研究領(lǐng)域[,。外泌體作為細(xì)胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受,。外泌體包含胞質(zhì)環(huán)境中富含的DNA，RNA,，蛋白質(zhì)和其它分析物,，研究表明，外泌體中的運(yùn)轉(zhuǎn)RNA和蛋白質(zhì)與一些病癥的生長(zhǎng)密切相關(guān),，有望作為診斷標(biāo)志物,。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系,，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過(guò)microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA，與肝病的發(fā)生密切相關(guān),。直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái),，無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基。廣州外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）,。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑,；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法,。通過(guò)密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí)，對(duì)離心時(shí)間極為敏感天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí),。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞,、免疫細(xì)胞,、血小板,、平滑肌細(xì)胞等,。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出,。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí)，對(duì)離心時(shí)間極為敏感,?；罴?xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體，含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA,、以及miRNA),。

外泌體的形成與鑒定：首先，細(xì)胞膜內(nèi)陷形成一個(gè)杯狀結(jié)構(gòu),，包括細(xì)胞表面蛋白和與細(xì)胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白,，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成,，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合,；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,，LSEs),，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過(guò)endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,，這一過(guò)程導(dǎo)致MVBs含有多個(gè)ILVs,。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA,、DNA,、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜,，通過(guò)離心截留上清中的外泌體,，截留完成后外泌體提取：差速離心,。差速離心仍然是較常見(jiàn)的外泌體分離技術(shù)之一,。蕪湖正規(guī)外泌體提取試劑報(bào)價(jià)

由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì),。廣州外泌體提取試劑廠家

Exosome,，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,，能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織,，因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)（targeteddeliverysystem）,。廣州外泌體提取試劑廠家