酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一,、原理簡介,。改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA酶,,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。二,、試劑盒特點:1,、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好,??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2,、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題,。3、獨有的RL裂解液配方,,可以有效的消除基因組污染,。4、多次漂洗去蛋白過程,,提取RNA純度更高,。5、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量,,提高了純度~試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,。徐州正規(guī)RNA提取試劑廠家批發(fā)價
植物RNA提取:植物組織中,,富含酚類化合物,,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產(chǎn)物,,或RNase的活性較高,。這些物質(zhì)在細胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們在提取植物組織時,,要選取針對植物的試劑盒,,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題,。1,、植物的果皮、果肉,、種子,、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時補充,,避免樣品融化,,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解,。2,、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,,否則組織研磨及裂解不徹底,,會使提取的RNA產(chǎn)量較低。3,、含水分較多的植物組織例如石榴果實、西瓜果實,、桃子果實等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg),。4、植物組織,,如植物葉片,、根莖、堅硬的果實等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,,再繼續(xù)進行提取步驟,。常規(guī)的組織勻漿機對植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用,。成都RNA提取試劑廠家推薦植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點:RNA純度更高,,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對純度要求很高的下游實驗,。
RNA提取試劑盒原理:該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,,簡單,經(jīng)濟有效的方法,,可從全血,,哺乳動物細胞,細菌細胞和菌類細胞中分離總RNA。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細胞并滅活核糖核酸酶,。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,,同時使污染物通過柱被有效地洗去。純的RNA用RE緩沖液洗脫,,不用酚提取或醇沉淀,。RNA提取試劑盒特點:1、快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA,。2,、即用型RNA,可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用,,例如RT-PCR,,cDNA合成,NorthernBlotting,,Differentialdisplay,,PrimerExtension,mRNAselection,。3,、適用樣品:全血,哺乳動物細胞,,細菌細胞和菌類細胞(樣品起始量:300μl全血,,10^7個哺乳動物細胞,10^9個細菌細胞和10^8個菌類細胞,??偣部梢允褂迷撛噭┖羞M行50次標(biāo)準(zhǔn)提取??俁NA的產(chǎn)量可達30μg,。產(chǎn)量可能因樣品類型而異。)
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),,能迅速裂解細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶活性,。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA,。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,,同時能破壞細胞及溶解細胞成分,。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相,。RNA存在于水相中,。水相轉(zhuǎn)移后,,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質(zhì)。RNA定量方法與DNA定量相似,。
rRNA是細胞內(nèi)的一種基本RNA,,與r蛋白一起構(gòu)成蛋白質(zhì)合成的場所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來越了解,,其在生物研究中也的得到了更普遍的應(yīng)用,,主要表現(xiàn)在生物進化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進化上的研究,。rRNA具有高度保守性,,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息?,F(xiàn)在還可用于在細菌分類,、細菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究,。目前,,人們已經(jīng)把rRNA在進化上的普遍差異應(yīng)用到了流行病學(xué)研究方面,通過對不同細菌進行鑒定分類,,從而明確病因,,追蹤傳染源,進一步控制及預(yù)防疾病,。在實際RNA提取中,,有幾個提取原則:保證RNA一級結(jié)構(gòu)的完整性。貴陽RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清,、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的。徐州正規(guī)RNA提取試劑廠家批發(fā)價
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。例如,,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),,兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),,低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8,。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,,不同濃度的凝膠位置變化較大,。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上,。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年,。RNA半衰期比較短,,容易降解,建議提取后盡快進行后續(xù)實驗,,如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,,NorthernBlot等徐州正規(guī)RNA提取試劑廠家批發(fā)價