鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,,收集上清液;在冰水浴中,,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,,4°C沉淀10小時,,去除上清液,,絮狀溶液高速冷凍離心處理,,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,;在冰水浴中,,調(diào)節(jié)pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,,4°C沉淀10小時,去除上清液,,去除上清液,,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀,。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,。長沙鼠尾膠原廠家推薦
膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚、筋,、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì)。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,,有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,膠原蛋白分為20幾個亞型,。但較為常見的為Ι,、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白,,即間質(zhì)膠原蛋白,。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良。徐州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價可直接或間接參與細(xì)胞的附著,。
I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,,經(jīng)過乙酸抽提、離心,、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,,可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),,適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,、胚胎細(xì)胞,、肌細(xì)胞、肺細(xì)胞,、神經(jīng)鞘細(xì)胞等,。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,規(guī)格為6/24孔板,,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,,可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,,細(xì)胞增殖速度快,形態(tài)均一,,細(xì)胞培養(yǎng)成功率高,。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外)才能完成生長過程,,而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用,。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,細(xì)胞就能更好地貼附上去,,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長,。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,,10,,100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),,應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,,TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá),。鼠尾Ⅰ型膠原:選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。珠海鼠尾膠原哪家好
膠原蛋白是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。長沙鼠尾膠原廠家推薦
以鼠尾膠原為支架的類似物的建立:探尋建立類似物的培養(yǎng)方法,。方法:原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,制備鼠尾膠原,,將鼠尾膠原溶液,、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物,。結(jié)果:形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論:①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,,該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),;②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型,。長沙鼠尾膠原廠家推薦